公开(公告)号：CN106893750B

公开(公告)日：2020-07-28

申请号：CN201710082579.4

申请日：2017-02-15

Applicant: 湖南杂交水稻研究中心 ,  湖南农业大学

Inventor： 余东 ,  袁定阳 ,  段美娟 ,  孙忠志 ,  谭炎宁 ,  孙学武 ,  袁隆平

IPC: C12P19/34 ,  C12N15/10

Abstract: 本发明提供了一种大分子DNA的体外无缝组装方法，能通过“分段+分步酶促组装”模式实现大分子DNA的无缝组装的目标的方法，其有益效果在于：1、利用拼接碱基将大片段DNA分子分成若干个小片段，降低了PCR的难度，并由于拼接碱基的存在实现了分步无缝组装的目标。2、与传统的酶切连接方法相比，本发明不依赖于连接，几乎不受到酶切位点的限制。3、克服了传统酶切连接方法和位点特异性重组方法容易引入额外碱基的缺点，实现了分步无缝连接的目的。4、本发明的方法比多个片段一步克隆酶促组装具有更可控的组装成功率和更高的序列准确率。

公开(公告)号：CN106893750A

公开(公告)日：2017-06-27

申请号：CN201710082579.4

申请日：2017-02-15

Applicant: 湖南杂交水稻研究中心 ,  湖南农业大学

Inventor： 余东 ,  袁定阳 ,  段美娟 ,  孙忠志 ,  谭炎宁 ,  孙学武 ,  袁隆平

IPC: C12P19/34 ,  C12N15/10

Abstract: 本发明提供了一种大分子DNA的体外无缝组装方法，能通过“分段+分步酶促组装”模式实现大分子DNA的无缝组装的目标的方法，其有益效果在于：1、利用拼接碱基将大片段DNA分子分成若干个小片段，降低了PCR的难度，并由于拼接碱基的存在实现了分步无缝组装的目标。2、与传统的酶切连接方法相比，本发明不依赖于连接，几乎不受到酶切位点的限制。3、克服了传统酶切连接方法和位点特异性重组方法容易引入额外碱基的缺点，实现了分步无缝连接的目的。4、本发明的方法比多个片段一步克隆酶促组装具有更可控的组装成功率和更高的序列准确率。