公开(公告)号：CN110603334B

公开(公告)日：2024-01-16

申请号：CN201780090470.3

申请日：2017-06-20

申请人： 深圳华大智造科技股份有限公司

发明人： 杨林 ,  黄国栋 ,  高雅 ,  张艳艳 ,  张海萍 ,  陈芳 ,  蒋浩君 ,  张韶红 ,  王雨倩 ,  谢一帆 ,  蒋慧

IPC分类号： C12Q1/686 ,  C12Q1/6806 ,  C12N15/11 ,  C40B50/06 ,  C12N15/10

摘要： 且，所述第一特异性序列和所述第二特异性序列提供了PCR引物对及其应用。其中，该PCR引 分别为针对靶序列的上游引物和下游引物，所述物对包括：第一引物和第二引物，其中，所述第一 第一随机序列和所述第二随机序列反向互补，所引物包含第一特异性序列和第一随机序列，所述 述第一特异性序列和所述第一随机序列之间连第一特异性序列位于所述第一引物的3’端，所述 接有预定酶切位点，所述第二特异性序列和所述第一随机序列位于所述第一引物的5’端，所述第 第二随机序列之间连接有预定酶切位点。二引物包含第二特异性序列和第二随机序列，所(56)对比文件Liu Huanting等.An efficient one-stepsite-directed deletion, insertion, singleand multiple-site plasmid mutagenesisprotocol《.BMC Biotechnol》.2008,第8卷(第1期),摘要、第1页左栏第1段-第10页左栏第1段.Bitinaite等.USER (TM) friendly DNAengineering and cloning method by uracilexcision《.Nucleic Acids Res》.2007,第35卷(第6期),摘要、第1992页左栏第2段-第2001页右栏第2段.Liu Huanting等.An efficient one-stepsite-directed deletion, insertion, singleand multiple-site plasmid mutagenesisprotocol《.BMC Biotechnol》.2008,第8卷(第1期),摘要、第1页左栏第1段-第10页左栏第1段.Bitinaite等.USER (TM) friendly DNAengineering and cloning method by uracilexcision《.Nucleic Acids Res》.2007,第35卷(第6期),摘要、第1992页左栏第2段-第2001页右栏第2段.Javier等.IVA cloning: A single-tubeuniversal cloning system exploitingbacterial In Vivo Assembly《.ScientificReports》.2016,第6卷摘要、第1页第1段-第10页第4段，附加材料.