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公开(公告)号：CN110484556B
公开(公告)日：2021-11-09
申请号：CN201810456822.9
申请日：2018-05-14
Applicant: 浙江省农业科学院
Abstract: 本发明涉及植物基因工程领域，具体涉及一种Atg5的瞬时沉默载体的用途。本发明通过将Atg5瞬时沉默载体与内质网、线粒体、过氧化物酶体或质体的GFP表达载体共浸润，揭示Atg5瞬时沉默载体在缓解不同细胞器定位的蛋白降解方面的用途。本发明所述的Atg5瞬时沉默载体能够作用于细胞器区域，促进细胞器外源蛋白的积累。本发明表明siatg5沉默的自噬途径涉及内质网、质体、线粒体、过氧化物酶体等绝大多数细胞场所，siatg5沉默载体可能对植物细胞中的多种场所、细胞器的自噬途径具有调节作用。本发明对于阐明Atg5基因所调控的自噬途径在影响外源蛋白表达方面的分子机理具有重要意义，对提高以植物作为生物反应器的外源蛋白的表达具有指导意义。
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公开(公告)号：CN106046175B
公开(公告)日：2020-03-13
申请号：CN201610442983.3
申请日：2016-06-16
Applicant: 浙江省农业科学院
Abstract: 本发明公开了一种特异检测水杨酸(SA)的融合蛋白，其中，该融合蛋白包括NPR1基因中的泛素‑26s蛋白酶体降解元件区域DNA序列所编码的蛋白和荧光蛋白，其中，该融合蛋白能够特异地被SA诱导降解。所述的融合蛋白，其中，该融合蛋白为NPR1的泛素‑26s蛋白酶体降解元件的基因和荧光蛋白基因所编码或所表达。利用该融合蛋白，可以检测植物体内的SA。
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公开(公告)号：CN105969795B
公开(公告)日：2019-10-29
申请号：CN201610439637.X
申请日：2016-06-16
Applicant: 浙江省农业科学院
Abstract: 本发明公开了一种用于实时检测植物体内水杨酸水平的植物质粒表达载体,其中，通过把该质粒载体接种到植物体中，实时检测植物体中SA水平，其中，所述的质粒载体从右到左包括如下结构：T‑DNA右边界元件序列‑35S启动子元件序列‑第一酶切位点‑NPR1的泛素‑26s蛋白酶体降解元件基因序列‑第一接头序列‑荧光序列‑第二接头序列‑细胞核定位蛋白(NLS)序列‑终止子序列‑35S启动子序列‑T‑DNA左边界序列，其中，该质粒载体所表达的融合蛋白能够特异被SA所以降解。通过该质粒载体在植物体中的表达，可以实时监测植物体内的SA的水平。
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公开(公告)号：CN106497925A
公开(公告)日：2017-03-15
申请号：CN201610885032.3
申请日：2016-10-11
Applicant: 浙江省农业科学院
Abstract: 本发明公开了用于连接非依赖的克隆技术(LIC)得接头序列，其中该接头序列为：上游序列：GCA GCA GGA GGC GG所示的核苷酸序列；和下游序列：CCG CCA CCA GCA GC所示的核苷酸序列。利用本发明序列，将该接头序列连接入质粒载体后形成的新的载体，可以实现目的片段的连接非依赖克隆，减少融合蛋白性质的变化。
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公开(公告)号：CN105695480A
公开(公告)日：2016-06-22
申请号：CN201610137501.3
申请日：2016-03-11
Applicant: 浙江省农业科学院
Abstract: 本发明涉及一个用于鉴定与内质网UPR反应相关植物因子的基因及其应用。本发明将一种大蒜X病毒(Garlic virus X,GarVX)编码的p11蛋白嵌合到马铃薯X病毒(Potato virus X,PVX)中，根据接种了嵌合病毒后症状表型的差异在本氏烟的病毒诱导基因沉默(virus induced gene silencing,VIGS)的植株中筛选出与内质网未折叠蛋白反应(unfolded protein response,UPR)相关的植物因子。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN105524919A
公开(公告)日：2016-04-27
申请号：CN201511027677.5
申请日：2015-12-31
Applicant: 浙江省农业科学院
Abstract: 本发明涉及基因工程领域，特别涉及一对用于连接非依赖克隆的接头序列及其应用。一种用于连接非依赖克隆的接头序列，该接头序列包括上游序列：gg gAg Cgg AAg Cgg，SEQ ID NO：7所示的核苷酸序列；和下游序列：gC Cag AgC CAC Cgc，SEQ ID NO：8所示的核苷酸序列。本发明的用于连接非依赖克隆(ligation independent cloing，LIC)序列，将该接头序列连接入质粒载体后形成的新的载体，可以实现目的片段的连接非依赖克隆。
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公开(公告)号：CN105219800A
公开(公告)日：2016-01-06
申请号：CN201510480826.7
申请日：2015-08-03
Applicant: 浙江省农业科学院
Abstract: 本发明涉及基因工程领域，具体的说，本发明涉及一种RNA植物病毒-烟草花叶病毒属的辣椒轻斑驳病毒(Pepper mild mottle virus,PMMoV)侵染性克隆载体制备，携带辣椒轻斑驳病毒侵染性克隆的农杆菌菌株的致病性分析及利用PMMoV侵染性克隆表达外源蛋白。本发明通过基因重组的方法将辣椒轻斑驳病毒上海海湾分离物的基因组构建到高效植物表达载体pCB301-CH上，重组载体通过电击转化转入农杆菌菌株，获得了具有侵染能力的病毒载体。利用该侵染性克隆可以构建植物表达载体，在寄主植物体内高效、稳定的表达外源蛋白。本发明为研究该病毒基因组结构和功能及病毒与寄主之间的相互作用研究提供了成熟的体系。
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公开(公告)号：CN101870973B
公开(公告)日：2012-02-15
申请号：CN201010201208.1
申请日：2010-06-04
Applicant: 浙江省农业科学院
IPC: C12N15/113
Abstract: 本发明涉及一种提高外源基因在植物体内表达水平的核苷酸序列，它是SEQ ID No：1所示的核苷酸序列，本发明提供一段核苷酸序列，将它连接到基因编码区的下游后再进行常规的外源基因在植物体内的表达过程，可提高外源基因表达水平1倍以上。本发明有益的效果是：利用分子生物学实验技术将本发明序列连到外源基因编码区终止密码子的下游，以融合片段作为一个整体进行常规的植物表达载体构建后进行外源基因在植物体内的表达，即可提高外源基因在植物体内的表达水平。
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公开(公告)号：CN101974786A
公开(公告)日：2011-02-16
申请号：CN201010277702.6
申请日：2010-09-09
Applicant: 浙江省农业科学院
Abstract: 本发明公开了一种构建真核生物cDNA文库的方法及其专用引物，属于基因工程技术领域。专用引物共有两对，一对为序列表中的3RRT和5RRT；另一对为序列表中的3AP和5AP。方法包括：1)以总RNA为模板，以序列表中的3RRT和5RRT为引物合成第一链cDNA；2)以序列表中的3AP和5AP合成双链cDNA；3)经琼脂糖凝胶电泳去除合成不完全的小片段产物后，将双链cDNA与pCR-XL-TOPO长片段PCR克隆载体重组连接，再将连接产物转化宿主大肠杆菌XL-Gold感受态细胞，即完成cDNA文库的构建。本发明可普遍用于mRNA具有polyA尾端的真核生物样品的cDNA文库构建。
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公开(公告)号：CN108220290B
公开(公告)日：2021-07-06
申请号：CN201611151143.8
申请日：2016-12-14
Applicant: 浙江省农业科学院
IPC: C12N15/113 , C12N15/82 , A01H5/00 , A01H5/10 , A01H6/46
Abstract: 本发明公开了水稻小分子RNA osa‑miR171b在抗水稻条纹叶枯病上的应用,本发明从水稻日本晴中高通量测序得到microRNA osa‑miR171b，用该microRNA构建到前体基因pre‑miR528序列中。该microRNA前体在水稻中过量表达osa‑miR171b，利用携带水稻条纹病毒的灰飞虱接种病毒后，转基因株系和野生型对照相比发病率和死亡率均降低，发病症状有所缓解。因此，在水稻中超表达osa‑miR171b对于提高水稻对水稻条纹叶枯病的耐受性具有重要意义，这为水稻耐受水稻条纹叶枯病分子育种提供新的资源和研究方法。
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