公开(公告)号：CN102876677A

公开(公告)日：2013-01-16

申请号：CN201210368291.0

申请日：2012-09-28

申请人： 浙江大学舟山海洋研究中心

发明人： 马文明 ,  俞炎琴 ,  庄浩瀚 ,  钱叶青 ,  杨劲树 ,  杨帆 ,  杨卫军

IPC分类号： C12N15/113 ,  C12N15/10

摘要： 本发明公开了一种双链RNA的制备方法。现有体外制备siRNA的方法价格高，定制周期长，实验规模受限制。本发明方法首先利用PCR扩增的方法克隆目的基因分子；利用pET-T7质粒构建含有目的基因片段的表达载体；将含有基因片段插入的pET-T7表达载体转化到表达型菌株E.coliHT115中，选取含有目的载体的阳性菌落；接种于LB液体培养基中，加入IPTG诱导培养；抽提总RNA，溶解于RNaseA缓冲液变性，冷却复性，加入RNaseA酶切，去除单链RNA，纯化双链RNA，溶解沉淀，所得溶液即为纯化后的双链RNA样品。本发明制备方法简单，实施步骤快捷，操作重复性强，样品合成量不受限制。

公开(公告)号：CN102749243A

公开(公告)日：2012-10-24

申请号：CN201210245038.6

申请日：2012-07-16

申请人： 浙江大学舟山海洋研究中心

发明人： 马文明 ,  杨卫军 ,  钱叶青 ,  俞炎琴 ,  杨帆 ,  杨劲树 ,  庄浩瀚

IPC分类号： G01N1/30

摘要： 本发明公布了一种虾类胚胎的细胞核染色方法。本发明方法首先取虾类胚胎置于3～5倍胚胎体积的A溶液中,静置分层后移除上层液相；加入2倍胚胎体积的正庚烷和4倍胚胎体积的甲醇，静置分层后移除上层溶液和中间层膜状组织；加入3～5倍胚胎体积的甲醇进行洗涤，重复洗涤3～5次；加入3～5倍胚胎体积的缓冲液进行洗涤，重复洗涤3～5次；避光浸泡在1～2倍胚胎体积的浓度为5～10μg/ml的DAPI溶液中进行细胞核染色，静置分层后移除液相；加入3～5倍胚胎体积的磷酸缓冲液进行洗涤，重复洗涤3～5次，得到最终的胚胎。本发明操作方法简单，实施步骤快捷，染色效果清晰。

公开(公告)号：CN102749243B

公开(公告)日：2014-05-14

申请号：CN201210245038.6

申请日：2012-07-16

申请人： 浙江大学舟山海洋研究中心

发明人： 马文明 ,  杨卫军 ,  钱叶青 ,  俞炎琴 ,  杨帆 ,  杨劲树 ,  庄浩瀚

IPC分类号： G01N1/30

摘要： 本发明公布了一种虾类胚胎的细胞核染色方法。本发明方法首先取虾类胚胎置于3～5倍胚胎体积的A溶液中,静置分层后移除上层液相；加入2倍胚胎体积的正庚烷和4倍胚胎体积的甲醇，静置分层后移除上层溶液和中间层膜状组织；加入3～5倍胚胎体积的甲醇进行洗涤，重复洗涤3～5次；加入3～5倍胚胎体积的缓冲液进行洗涤，重复洗涤3～5次；避光浸泡在1～2倍胚胎体积的浓度为5～10ug/ml的DAPI溶液中进行细胞核染色，静置分层后移除液相；加入3～5倍胚胎体积的磷酸缓冲液进行洗涤，重复洗涤3～5次，得到最终的胚胎。本发明操作方法简单，实施步骤快捷，染色效果清晰。