公开(公告)号：CN109868283A

公开(公告)日：2019-06-11

申请号：CN201910128264.8

申请日：2019-02-21

Applicant: 浙江农林大学

Inventor： 朱丽颖 ,  郑月萍 ,  徐雪珍 ,  段芊芊 ,  郑志富

IPC: C12N15/82 ,  A01H5/00 ,  A01H6/20

Abstract: 本发明涉及一种评估CRISPR/Cas9基因编辑效率或脱靶频率的方法，属于生物工程领域，主要包括三个部分：首先为了快速筛选转基因植株，选择标记基因mCherry插入表达载体中；其次为了快速鉴定CRISPR/Cas9基因的编辑效率和脱靶频率，将脂肪酸脱氢酶FAD2、FAD3作为靶基因插入载体中；最后利用靶基因突变后脂肪酸组分的变化，通过检测转基因阳性植株中C18不饱和脂肪酸的组成快速简便地筛选出被编辑的植株和未被编辑的植株，从而快速、准确、高效地确定特定的CRISPR/Cas9基因编辑系统的编辑效率和脱靶效应。

公开(公告)号：CN112538481B

公开(公告)日：2022-05-20

申请号：CN202011577361.4

申请日：2020-12-28

Applicant: 浙江农林大学 ,  杭州瑞丰生物科技有限公司

Inventor： 郑月萍 ,  徐雪珍 ,  郑挺 ,  唐梦珍 ,  童红英 ,  沈志成 ,  丁硕 ,  段芊芊 ,  郑志富

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/82 ,  C12N15/65 ,  A01H5/00 ,  A01H6/54 ,  A01H6/20 ,  A01H6/14

Abstract: 本发明涉及一种利用基因编辑技术获得高油酸植株的方法，属于植物基因工程技术领域，主要包括三个部分：首先，为了提高基因编辑效率，利用AtKASII启动子驱动Cas9基因表达；其次，为了提高油酸含量，同时降低亚油酸和亚麻酸含量，选择将mFAD2‑1A，GmFAD2‑1B和GmFAD3A作为靶基因，并设计两个靶序列插入载体中；最后，通过对大豆籽粒中脂肪酸组分分析，以及分子鉴定和测序分析筛选得到三基因纯合突变的高油酸大豆植株。本发明为高油酸含量的油料作物品质育种工作提供了一种全新的途径，具有良好的应用前景。

公开(公告)号：CN109868283B

公开(公告)日：2021-07-20

申请号：CN201910128264.8

申请日：2019-02-21

Applicant: 浙江农林大学

Inventor： 朱丽颖 ,  郑月萍 ,  徐雪珍 ,  段芊芊 ,  郑志富

IPC: C12N15/82 ,  A01H5/00 ,  A01H5/10 ,  A01H6/20

Abstract: 本发明涉及一种评估CRISPR/Cas9基因编辑效率或脱靶频率的方法，属于生物工程领域，主要包括三个部分：首先为了快速筛选转基因植株，选择标记基因mCherry插入表达载体中；其次为了快速鉴定CRISPR/Cas9基因的编辑效率和脱靶频率，将脂肪酸脱氢酶FAD2、FAD3作为靶基因插入载体中；最后利用靶基因突变后脂肪酸组分的变化，通过检测转基因阳性植株中C18不饱和脂肪酸的组成快速简便地筛选出被编辑的植株和未被编辑的植株，从而快速、准确、高效地确定特定的CRISPR/Cas9基因编辑系统的编辑效率和脱靶效应。

公开(公告)号：CN112538481A

公开(公告)日：2021-03-23

申请号：CN202011577361.4

申请日：2020-12-28

Applicant: 浙江农林大学 ,  杭州瑞丰生物科技有限公司

Inventor： 郑月萍 ,  徐雪珍 ,  郑挺 ,  唐梦珍 ,  童红英 ,  沈志成 ,  丁硕 ,  段芊芊 ,  郑志富

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/82 ,  C12N15/65 ,  A01H5/00 ,  A01H6/54 ,  A01H6/20 ,  A01H6/14

Abstract: 本发明涉及一种利用基因编辑技术获得高油酸植株的方法，属于植物基因工程技术领域，主要包括三个部分：首先，为了提高基因编辑效率，利用AtKASII启动子驱动Cas9基因表达；其次，为了提高油酸含量，同时降低亚油酸和亚麻酸含量，选择将mFAD2‑1A，GmFAD2‑1B和GmFAD3A作为靶基因，并设计两个靶序列插入载体中；最后，通过对大豆籽粒中脂肪酸组分分析，以及分子鉴定和测序分析筛选得到三基因纯合突变的高油酸大豆植株。本发明为高油酸含量的油料作物品质育种工作提供了一种全新的途径，具有良好的应用前景。