公开(公告)号：CN111440759A

公开(公告)日：2020-07-24

申请号：CN202010151105.2

申请日：2020-03-06

Applicant: 河南农业大学

Inventor： 杨浩 ,  苏磊 ,  尤晨 ,  王亮 ,  李雪 ,  王志飞

IPC: C12N5/04

Abstract: 本发明公开了一种同时分离提取细胞核和叶绿体的方法，旨在解决现有分离提取方法中无法同时分离出高活性细胞核和叶绿体技术问题，其主要步骤包括：（1）取植株幼苗或叶片，剪碎后加入破碎缓冲液，研磨破碎后过滤得匀浆液，再经离心分离，弃上清液得沉淀物；（2）向上步骤所得沉淀物中加入分离缓冲液混匀得到重悬液，再将所述重悬液加至Percoll密度梯度分离液的上面，进行梯度离心分离；（3）分别抽取分离液梯度交接面处的叶绿体和底部沉淀物，再分别加入纯化缓冲液进行离心纯化分离，去上清液得对应的叶绿体和细胞核。本发明利用不同缓冲液对细胞核和叶绿体的分离提纯，具有操作简便，所得到的纯化后细胞核提取率高达80%，叶绿体的提取率高达90%。

公开(公告)号：CN111440759B

公开(公告)日：2021-01-15

申请号：CN202010151105.2

申请日：2020-03-06

Applicant: 河南农业大学

Inventor： 杨浩 ,  苏磊 ,  尤晨 ,  王亮 ,  李雪 ,  王志飞

IPC: C12N5/04

Abstract: 本发明公开了一种同时分离提取细胞核和叶绿体的方法，旨在解决现有分离提取方法中无法同时分离出高活性细胞核和叶绿体技术问题，其主要步骤包括：（1）取植株幼苗或叶片，剪碎后加入破碎缓冲液，研磨破碎后过滤得匀浆液，再经离心分离，弃上清液得沉淀物；（2）向上步骤所得沉淀物中加入分离缓冲液混匀得到重悬液，再将所述重悬液加至Percoll密度梯度分离液的上面，进行梯度离心分离；（3）分别抽取分离液梯度交接面处的叶绿体和底部沉淀物，再分别加入纯化缓冲液进行离心纯化分离，去上清液得对应的叶绿体和细胞核。本发明利用不同缓冲液对细胞核和叶绿体的分离提纯，具有操作简便，所得到的纯化后细胞核提取率高达80%，叶绿体的提取率高达90%。