公开(公告)号：CN116004549A

公开(公告)日：2023-04-25

申请号：CN202211630235.X

申请日：2022-12-19

Applicant: 江苏省农业科学院

Inventor： 李文良 ,  张纹纹 ,  何苗锋 ,  毛立 ,  程子龙 ,  刘鑫欢 ,  杨蕾蕾 ,  刘茂军 ,  白娟 ,  姜焱 ,  祝贺

IPC: C12N5/20 ,  C07K16/10 ,  G01N33/577 ,  G01N33/569 ,  G01N33/58 ,  A61K39/42 ,  A61P31/14 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明提供分泌抗牛病毒性腹泻病毒E2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用，属于生物技术领域。杂交瘤细胞株1E2B3，保藏编号为CCTCC NO：C2022348。本发明还提供该杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体及其在制备检测牛病毒性腹泻病毒E2蛋白抗体的试剂盒、制备BVDV‑1特异性治疗剂和抗原检测试剂等方面的应用。本发明杂交瘤细胞株能够产生针对BVDV‑1 E2蛋白的单克隆抗体。该单克隆抗体的阻断ELISA方法可用于病毒感染与灭活疫苗免疫抗体的检测；该单克隆抗体具有中和病毒的活性，可用于BVDV相关疾病治疗制剂的研发；该单克隆抗体具有良好的反应性可用于Western blot检测和免疫荧光检测。

公开(公告)号：CN114540523A

公开(公告)日：2022-05-27

申请号：CN202210315056.0

申请日：2022-03-29

Applicant: 江苏省农业科学院 ,  江苏大学 ,  东营市畜牧兽医站

Inventor： 李文良 ,  恽佳蕾 ,  蒋康富 ,  王少辉 ,  邹彬 ,  何苗锋 ,  毛立 ,  杨蕾蕾 ,  张纹纹 ,  孙敏 ,  刘茂军 ,  程子龙

IPC: C12Q1/689 ,  C12Q1/686 ,  C12N15/11 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明提供检测O8、O9、O89血清型大肠杆菌的引物组合物及试剂盒，属于生物技术和分子生物学领域。该检测O8、O9、O89血清型大肠杆菌的引物组合物，包括引物对A、引物对B和引物对C，所述引物对A包括引物1和引物2，所述引物对B包括引物3和引物4，所述引物对C包括引物5和引物6，所述引物1‑6的核苷酸序列依次如SEQ ID NO:1‑6所示。本发明试剂盒操作简单、特异性强、敏感性高、能同时检测O8、O9及O89血清型大肠杆菌的引物组合物及试剂盒。

公开(公告)号：CN113736799A

公开(公告)日：2021-12-03

申请号：CN202111092942.3

申请日：2021-09-17

Applicant: 江苏省农业科学院 ,  扬州大学

Inventor： 李文良 ,  李燕华 ,  杨蕾蕾 ,  毛立 ,  钱晶 ,  孙敏 ,  刘茂军 ,  张纹纹 ,  程子龙

IPC: C12N15/45 ,  C12N15/85 ,  C12N7/00

Abstract: 本发明提供山羊副流感病毒3型感染性cDNA克隆构建方法及其应用，属于生物技术领域。该构建方法包括：以山羊副流感病毒3型的总RNA反转录产物为模板，扩增A、B、C和D片段；将片段A和B、片段C和D分别插入pCI‑neo‑1载体中，得到重组载体pCI‑A‑B、pCI‑C‑D；以pCI‑A‑B为模板，扩增片段A‑B；以pCI‑C‑D为模板，扩增C‑D片段；将线性化pYES1L载体、A‑B和C‑D片段混和，导入酵母内进行同源重组，得到山羊副流感病毒3型感染性cDNA克隆质粒。本发明构建方法效率高，得到的感染性cDNA克隆拯救的病毒感染细胞后能够快速产生细胞病变，病毒滴度高，且保持稳定。

公开(公告)号：CN108949700A

公开(公告)日：2018-12-07

申请号：CN201810926226.2

申请日：2018-08-15

Applicant: 江苏省农业科学院

Inventor： 李文良 ,  毛立 ,  郝飞 ,  李基棕 ,  杨蕾蕾 ,  张纹纹 ,  王钟毓 ,  孙敏 ,  刘茂军 ,  江杰元

IPC: C12N7/00 ,  C12Q1/70 ,  C12Q1/686 ,  C12R1/93

CPC classification number: C12N7/00 ,  C12N2760/18621 ,  C12N2760/18651 ,  C12Q1/686 ,  C12Q1/701 ,  C12Q2521/107

Abstract: 本发明属于兽用生物制品领域，公开了一种山羊副流感病毒3型JS14‑2株及其在制备灭活疫苗中的应用。分离纯化获得山羊副流感病毒3型JS14‑2病毒株后，将病毒液经离心、甲醛灭活，加入佐剂乳化制备获得灭活疫苗。本发明提供了一种可用于制备山羊副流感病毒3型灭活疫苗的病毒株，该毒株属于国内流行毒株，毒力强，抗原性好；该毒株在MDBK细胞上具有较好的生长特性，可以获得稳定的高滴度（大于等于107 TCID50/mL，血凝价大于等于28）；疫苗制备方法完善，免疫原性与免疫保护效果良好；使用免疫剂量低，安全性高，免疫持续期长，大大节约生产及使用成本，有利于在临床实际中有效的防控该病。

公开(公告)号：CN105441593A

公开(公告)日：2016-03-30

申请号：CN201610003794.6

申请日：2016-01-04

Applicant: 江苏省农业科学院

Inventor： 李基棕 ,  江杰元 ,  李文良 ,  毛立 ,  郝飞 ,  杨蕾蕾 ,  张纹纹

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/68 ,  C12N15/11 ,  C12R1/93

CPC classification number: C12Q1/701 ,  C12Q1/6851 ,  C12Q2531/113 ,  C12Q2561/113 ,  C12Q2563/107

Abstract: 本发明涉及一种检测山羊副流感病毒3型核苷酸片段的引物和探针序列，属于动物病原微生物检测技术领域。引物对包括：由序列为GCTTGGCTTCTTTGAAATGG的上游引物CPIVTF和序列为GCCTGCAGAAGTTCCTTGTC的下游引物CPIVTR组成的引物对；探针CPIVTM序列为CAATCGGACTAGCCAAGTATGGTGGGA。该套引物和探针序列根据GenBank上山羊副流感病毒3型全基因组序列KT215610设计，具有较高的灵敏度和特异性。

公开(公告)号：CN103951734A

公开(公告)日：2014-07-30

申请号：CN201410161997.9

申请日：2014-04-21

Applicant: 江苏省农业科学院

Inventor： 毛立 ,  李文良 ,  刘霞 ,  江杰元 ,  杨蕾蕾 ,  张纹纹 ,  邓加武 ,  王钟毓

IPC: C07K14/08 ,  C12N15/40 ,  C12N15/70 ,  G01N33/68

CPC classification number: C07K14/005 ,  C12N15/70 ,  C12N2770/24022 ,  G01N33/56983 ,  G01N33/6803

Abstract: 本发明属于分子生物学领域，涉及一种边界病病毒（BDV）重组E2蛋白及其IgG抗体检测试剂盒。系将BDVE2蛋白主要抗原区域克隆入原核表达载体得到重组表达载体，将该重组表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3)，经重组大肠杆菌表达纯化后获得重组BDVE2蛋白，Westernblot试验证明该蛋白具有良好的抗原性。将该蛋白包被酶标板，通过抗原包被浓度、血清稀释度和作用时间、二抗浓度和作用时间以及显色时间的优化建立ELISA方法，检测山羊BDV阴性血清确定临界值和判定标准。本发明构建的重组菌株对外源蛋白表达稳定，抗原性好；在此基础上首次用于建立边界病病毒IgG抗体ELISA检测方法。

公开(公告)号：CN112522210B

公开(公告)日：2022-08-19

申请号：CN202011516349.2

申请日：2020-12-21

Applicant: 江苏省农业科学院

Inventor： 毛立 ,  刘茂军 ,  李文良 ,  张纹纹 ,  李基棕 ,  杨蕾蕾 ,  孙敏

IPC: C12N5/20 ,  C07K16/10 ,  G01N33/577 ,  G01N33/569

Abstract: 本发明公开了一种分泌抗小反刍兽疫病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其单抗与应用，所述的杂交瘤细胞株为4B2，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C2020266。本发明所提供的单克隆抗体可用于检测PPRV，特异性强，不与羊疱疹病毒1型、山羊副流感病毒3型、牛病毒性腹泻病毒1型、牛病毒性腹泻病毒2型等常见羊病毒发生反应。且本发明的提出为建立一种快速、简易、准确的检测方法，以及在免疫机制研究、免疫功能研究、检测方法建立等方面提供技术手段，对PPRV的防控及实验室研究都具有重要意义。

公开(公告)号：CN111041000B

公开(公告)日：2022-07-05

申请号：CN201911407906.4

申请日：2019-12-31

Applicant: 江苏省农业科学院

Inventor： 李文良 ,  张聪 ,  张纹纹 ,  陈亚玲 ,  杨蕾蕾 ,  毛立 ,  李基棕 ,  孙敏 ,  刘茂军

IPC: C12N5/20 ,  C07K16/10 ,  G01N33/68 ,  G01N33/577 ,  G01N33/569 ,  G01N33/535 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明提供一株分泌抗裂谷热病毒NSs蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用，属于生物技术领域。分泌抗裂谷热病毒NSs蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株2D6D10，其保藏编号为CCTCC NO：C2019269。本发明还提供所述杂交瘤细胞株分泌的抗裂谷热病毒NSs蛋白单克隆抗体及其在制备裂谷热病毒NSs蛋白抗体检测试剂盒方面的应用。本发明杂交瘤细胞2D6D10能够产生针对RVFV非结构蛋白NSs蛋白的单克隆抗体，该单克隆抗体具有阻断作用，因此本发明的阻断ELISA试剂盒可用于病毒感染与灭活疫苗或缺失疫苗免疫抗体的鉴别诊断。

公开(公告)号：CN108913665A

公开(公告)日：2018-11-30

申请号：CN201810831978.0

申请日：2018-07-26

Applicant: 江苏省农业科学院

Inventor： 郝飞 ,  张纹纹 ,  李文良 ,  刘茂军 ,  毛立 ,  李基棕 ,  杨蕾蕾 ,  孙敏 ,  袁朗 ,  肖蓉

IPC: C12N5/20 ,  C07K16/08 ,  G01N33/569 ,  A61K39/42 ,  A61P31/22 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明涉及一种分泌抗CpHV-1单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用，属于免疫技术领域。本发明从建立的分泌抗CpHV-1单克隆抗体的杂交瘤细胞库中筛选出一株杂交瘤细胞4A4株。用其制备的小鼠腹水单克隆抗体对CpHV-1的中和效价达28。本发明的杂交瘤细胞4A4株分泌的单克隆抗体可用于CpHV-1发病羊的临床治疗，疗效显著，安全无不良副反应。本发明的杂交瘤细胞4A4株制备的单克隆抗体治疗剂，保存两年后中和效价不降低，稳定性好。此外，利用本发明的杂交瘤细胞4A4株分泌的单克隆抗体作为检测抗体建立的间接免疫荧光（IFA）检测方法，具有较好的灵敏性和特异性，可以用于CpHV-1感染的鉴别诊断。

公开(公告)号：CN105838678A

公开(公告)日：2016-08-10

申请号：CN201610222623.2

申请日：2016-04-11

Applicant: 江苏省农业科学院

Inventor： 毛立 ,  李文良 ,  江杰元 ,  杨蕾蕾 ,  郝飞 ,  李基棕 ,  张纹纹 ,  周天赐

IPC: C12N5/20 ,  C07K16/10 ,  G01N33/577 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明属于分子生物学领域，涉及一种分泌CPIV3抗体的杂交瘤细胞株及ELISA试剂盒。本发明使用的山羊副流感病毒3型CPIV3 免疫原是从临床分离的CPIV3 JS2013毒株，从建立的分泌 CPIV3 单克隆抗体的杂交瘤细胞库中筛选出一株杂交瘤细胞 2E6。本发明的杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体具有阻断作用，应用于CPIV3 阻断ELISA试剂盒。本发明的CPIV3 阻断ELISA试剂盒可特异性检测CPIV3 感染或者免疫山羊后产生的抗体。收集212份山羊临床血清样品，分别用上述建立的阻断ELISA方法和中和实验检测血清中CPIV3抗体。阻断ELISA结果与中和实验相比，符合率为98.8%。