公开(公告)号：CN114134125B

公开(公告)日：2023-09-26

申请号：CN202110593384.2

申请日：2021-05-28

Applicant: 江苏大学

Inventor： 崔恒林 ,  殷雪矇 ,  侯靖

IPC: C12N9/06 ,  C12N15/74 ,  C12N1/21 ,  A23L5/20 ,  C02F3/34 ,  C02F101/16 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明属于基因工程领域，涉及一种嗜盐古菌亚硝酸盐还原酶的制备方法及其应用；步骤为：首先基于嗜盐古菌(Haloterrigena sp.)KZCA68‑1的基因组获得编码基因nirKHtg；通过分子克隆技术将nirKHtg连接到载体上构建重组质粒；将重组质粒转化嗜盐古菌宿主，得到转化后的重组宿主细胞在Hv‑YPC液体培养基中培养至稳定期后低温离心收集菌体，于细胞裂解液中进行重悬，经超声破碎、离心收集上清液，用于重组蛋白纯化；采用镍亲和层析纯化以及凝胶过滤层析纯化后，获得高纯度还原酶，记为NirKHtg。本发明得到的NirKHtg具有良好的酶学特性，高盐腌制食品、废水处理等过程中降解亚硝酸盐。

公开(公告)号：CN114134125A

公开(公告)日：2022-03-04

申请号：CN202110593384.2

申请日：2021-05-28

Applicant: 江苏大学

Inventor： 崔恒林 ,  殷雪矇 ,  侯靖

IPC: C12N9/06 ,  C12N15/74 ,  C12N1/21 ,  A23L5/20 ,  C02F3/34 ,  C02F101/16 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明属于基因工程领域，涉及一种新型嗜盐古菌亚硝酸盐还原酶的制备方法及其应用；步骤为：首先基于嗜盐古菌(Haloterrigena sp.)KZCA68‑1的基因组获得编码基因nirKHtg；通过分子克隆技术将nirKHtg连接到载体上构建重组质粒；将重组质粒转化嗜盐古菌宿主，得到转化后的重组宿主细胞在Hv‑YPC液体培养基中培养至稳定期后低温离心收集菌体，于细胞裂解液中进行重悬，经超声破碎、离心收集上清液，用于重组蛋白纯化；采用镍亲和层析纯化以及凝胶过滤层析纯化后，获得高纯度还原酶，记为NirKHtg。本发明得到的NirKHtg具有良好的酶学特性，高盐腌制食品、废水处理等过程中降解亚硝酸盐。