公开(公告)号：CN117587000A

公开(公告)日：2024-02-23

申请号：CN202311589249.6

申请日：2023-11-24

Applicant: 江南大学

Inventor： 吕小妹 ,  曾秋倩 ,  杨瑞金 ,  赵伟 ,  王璐

IPC: C12N9/90 ,  C12N15/61 ,  C12N15/56 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12N9/38 ,  C12P19/12 ,  A23L33/125 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了通过构建体内CE‑MI酶级联催化体系提高乳糖到乳果糖转化率，属于酶工程领域。本发明以大肠杆菌表达CsCE/Q371E实现乳糖的细胞发酵生产，通过将大肠杆菌的lacZ基因敲除将乳果糖产量达到3.55g/L。为解除依匹乳糖到乳果糖结构异构转化的限速步骤，提高乳糖到乳果糖转化率，挖掘到一款MmMI酶与CsCE酶级联催化，产量达到4.0g/L。通过定点饱和突变获得一款结构异构催化性能提升的突变体MmMI/F242N；在此基础上，通过RBS工程调控优化CsCE与MmMI的表达量，在添加8g/L乳清粉作为底物时摇瓶发酵，乳果糖产量达到6.12g/L，其转化率91.3％，为目前报道最高水平。