公开(公告)号：CN115960812A

公开(公告)日：2023-04-14

申请号：CN202310014321.6

申请日：2023-01-05

Applicant: 江南大学

Inventor： 沐万孟 ,  朱莺莺 ,  孟佳炜 ,  张文立

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12N15/56 ,  C12N15/61 ,  C12P19/32 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种高产L‑岩藻糖的重组大肠杆菌的构建方法及应用，属于微生物基因工程领域。本发明以高产2′‑岩藻糖基乳糖工程菌为宿主，通过游离表达α‑L‑岩藻糖苷酶得到分解效率更高的α‑L‑岩藻糖苷酶AcfA。针对L‑岩藻糖被竞争途径分解代谢的问题，敲除了鼠李糖异构酶基因rhaA，岩藻糖异构酶基因fucI和L‑岩藻糖激酶基因fucK。又将α‑L‑岩藻糖苷酶编码基因afcA整合至宿主基因组arsB位点，且使用强启动子PJ23119实现基因的启动表达。又通过改变IPTG和乳糖的添加量优化培养条件，最终摇瓶最高产量达到6.31g/L。分批补料培养条件下，在5L发酵罐中L‑岩藻糖的产量可达51.05g/L，是迄今报道的最高值，OD600最高达到了144，在大规模工业应用中表现出显著的生产潜力。

公开(公告)号：CN119552791A

公开(公告)日：2025-03-04

申请号：CN202411774464.8

申请日：2024-12-05

Applicant: 江南大学

Inventor： 沐万孟 ,  朱莺莺 ,  孟佳炜 ,  张文立

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/53 ,  C12N15/54 ,  C12N15/56 ,  C12N15/61 ,  C12N15/70 ,  C12P19/02 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及一种产L‑岩藻糖的工程大肠杆菌及其应用，其通过代谢工程策略，利用基因组整合和质粒表达路径基因相结合的方式，增强了L‑岩藻糖的生产，通过优化双质粒系统，加强前体供应，实现了高效生产L‑岩藻糖。此外，引入hok/sok系统和cysC的营养缺陷系统，成功构建了基于质粒的无抗生素依赖的工程菌株。该菌株在不添加抗生素的情况下，通过摇瓶培养和补料培养，分别产生了7.99g/L和61.91g/L的L‑岩藻糖，提供了迄今为止报道的最高L‑岩藻糖产量，并且发酵过程完全无需抗生素的使用。