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公开(公告)号：CN116426565A
公开(公告)日：2023-07-14
申请号：CN202310275729.9
申请日：2023-03-16
申请人： 武汉市农业科学院 , 新疆农业科学院海南三亚农作物育种试验中心 , 新疆农业科学院哈密瓜研究中心
IPC分类号： C12N15/84 , C12N15/113 , C12N15/53 , A01H5/00 , A01H6/34
摘要： 本发明涉及基因编辑技术领域，具体涉及一种适用于甜瓜CRISPR/Cas9基因编辑的载体及其应用。本发明通过将pYL_Cas9Pubi_B载体启动子修改为“pAtUBQ10+SV40NLS”，“Cas9+SV40NLS+NOS(t)”元件替换为pMOD_A0501载体上的“AtCas9+SV40NLS+HSP(t)”，之后在Asc酶切位点处按顺序加入pAtU6‑26启动子、2X的BsaI酶切位点、gRNA‑sc和AtU6‑1(t)终止子，使其能够适用于甜瓜CRISPR/Cas9基因编辑的载体，且当其不添加可视化元件时，在甜瓜中的编辑效率可达到3.23％，添加可视化元件后，其编辑效率可达到2.08％，该研究对于完善优化pYL_Cas9Pubi_B载体在甜瓜中的应用并为进一步提高甜瓜的基因编辑效率奠定了基础。
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公开(公告)号：CN117051159A
公开(公告)日：2023-11-14
申请号：CN202311123840.2
申请日：2023-08-30
申请人： 武汉市农业科学院
IPC分类号： C12Q1/6895 , C12N15/11
摘要： 本发明涉及基因工程育种技术领域，具体涉及一种鉴定西瓜果皮耐裂性状的InDel分子标记及其应用，所述InDel分子标记在耐裂西瓜中的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，所述InDel分子标记在果皮不耐裂西瓜中的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示，编码该InDel分子标记的正向引物：TGCAGTCTATCGCCCAATGA、反向引物：TGCATGCTAAGCTTTCATTTTGT。本发明提供的InDel分子标记可以快速、高效、准确地鉴定西瓜中是否存在果皮耐裂性状相关控制基因；利用该InDel分子标记进行果皮耐裂西瓜辅助育种时，不仅可克服性状表型鉴定的困难，还能实现早期、快速鉴定，缩短周期，大幅降低人力物力成本，有助于促进果皮耐裂西瓜新品种的选育。
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公开(公告)号：CN114836462B
公开(公告)日：2024-03-26
申请号：CN202210309348.3
申请日：2022-03-28
申请人： 武汉市农业科学院
摘要： 一种高效的农杆菌介导甜瓜遗传转化方法，包括：S1、选种消毒后接种于种子发芽培养基MeM1上暗培养，备用；S2、用农杆菌浸染培养基I M悬浮菌液将经步骤S1生长健壮的甜瓜苗上切除的子叶外植体进行浸染，最后将浸染的子叶外植体置入农杆菌共培养基MeM2上共培养，备用；S3、将经步骤S2共培养后的子叶外植体置于诱导芽再生培养基MeM3上培养，每两周继代一次，备用；S4、将步骤S3培养基上再生的芽丛切下置于芽延长培养基MeM4中继续筛选培养，直到芽延长至2cm后转移到生根培养基中；S5、将经步骤S4获得的芽转移至生根培养基MeM5上生长，之后转移至营养钵内培养；优点是：同时适用于薄皮甜瓜、厚皮甜瓜，并使得再生芽的黄化率低至1.6％。
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公开(公告)号：CN110484559B
公开(公告)日：2021-07-02
申请号：CN201910651169.6
申请日：2019-10-09
申请人： 武汉市农业科学院 , 武汉联农种业科技有限责任公司
发明人： 万丽丽
摘要： BnaC2‑GMYB28基因编辑获得种子低硫苷油菜的方法，包括以下步骤：确定硫苷合成关键基因并确定靶基因SgRNA序列；表达盒构建；基因编辑载体构建；基因编辑载体转化农杆菌；油菜种子播种；农杆菌活化准备；外植体制备与浸染；外植体转移与培养。本发明确定了油菜调控种子硫苷合成的内源基因，利用基因编辑技术对其定向突变，所得到的几种不同的突变类型的单株，其种子硫苷相比对照显著降低，自交后得到的T1家系种子硫苷含量极显著低于未编辑的受体材料，表明利用这项技术能够快速获得无转基因外源片段，种子低硫苷表型且稳定遗传的油菜。
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公开(公告)号：CN108770686B
公开(公告)日：2021-04-02
申请号：CN201810488270.X
申请日：2018-05-21
申请人： 武汉市农业科学院
摘要： 本发明涉及一种油菜小孢子高效培养方法，步骤包括：S1、取材、选蕾；S2、加倍培养：花粉用含有14～16mg/L秋水仙碱的NLN‑16液体培养基稀释暗培养；S3、胚诱导培养：将加倍培养后没有污染的NLN‑16花粉悬浮液离心，留下沉淀的花粉用含有7～8mg/L秋水仙碱的NLN‑13培养液稀释进行暗培养；S4、再生苗培养；S5、成苗移栽。本发明建立了一套油菜高效小孢子培养技术体系，这套技术能够有效地提高目前难以出胚基因型材料的出胚效率、一次成苗率和加倍率。
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公开(公告)号：CN109511548A
公开(公告)日：2019-03-26
申请号：CN201811200894.3
申请日：2018-10-16
申请人： 武汉市农业科学院
IPC分类号： A01H4/00
摘要： 本发明公开了一种田间油菜组织快速繁殖的方法，具体包括将甘蓝型油菜Polima CMS恢复系627R、621R、616R中的油菜花蕾剥除了花萼、花瓣后剩下的子房和花柄连接部位和油菜侧芽进行合适的培养，得到不定芽后再置于添加有矮壮素的培养基中进行培养，得到壮苗。本发明所述方法实用性强，大幅提高油菜组织的繁殖速度，再生频率高，且有利于不定芽的根系生长，得到强壮幼苗，建立和优化了恢复系油菜的快繁再生体系，可快速获得具有优良性状的油菜新种质。
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公开(公告)号：CN114836462A
公开(公告)日：2022-08-02
申请号：CN202210309348.3
申请日：2022-03-28
申请人： 武汉市农业科学院
摘要： 一种高效的农杆菌介导甜瓜遗传转化方法，包括：S1、选种消毒后接种于种子发芽培养基MeM1上暗培养，备用；S2、用农杆菌浸染培养基I M悬浮菌液将经步骤S1生长健壮的甜瓜苗上切除的子叶外植体进行浸染，最后将浸染的子叶外植体置入农杆菌共培养基MeM2上共培养，备用；S3、将经步骤S2共培养后的子叶外植体置于诱导芽再生培养基MeM3上培养，每两周继代一次，备用；S4、将步骤S3培养基上再生的芽丛切下置于芽延长培养基MeM4中继续筛选培养，直到芽延长至2cm后转移到生根培养基中；S5、将经步骤S4获得的芽转移至生根培养基MeM5上生长，之后转移至营养钵内培养；优点是：同时适用于薄皮甜瓜、厚皮甜瓜，并使得再生芽的黄化率低至1.6％。
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公开(公告)号：CN109743927B
公开(公告)日：2021-11-19
申请号：CN201910194774.5
申请日：2019-03-14
摘要： 本发明公开了一种提高扁豆发芽率的扁豆种子处理方法，涉及蔬菜种植领域，该方法包括以下步骤：挑选扁豆种子，加入温度为25～35℃、pH为6～8的水中，加入抗菌材料保温1～2h；抗菌材料与扁豆种子的质量比为0.001～0.006，抗菌材料的壳体结构中包裹有杀菌剂和气体释放载体，杀菌剂包括腐殖质，壳体结构采用质量比为1:0.1～1:0.01～0.005的壳聚糖、明胶和脂质体构成；将浸泡过的种子放在温度为30～35℃、湿度为60～80％的条件下恒温催芽，待种子破衣后，调整温度至24～25℃、湿度为40～60％，待种芽生长至1～5mm催芽结束。本发明能够针对带有病原细菌的种子进行作用。
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公开(公告)号：CN110892866B
公开(公告)日：2021-06-01
申请号：CN201910966016.0
申请日：2019-10-12
申请人： 武汉市农业科学院
摘要： 本发明涉及植物组织培养技术领域，公开了一种提高子叶胚得出率的油菜小孢子培养基和培养方法，所述培养基为固液双层培养基，所述培养基上层为NLN13液体培养基，所述培养基下层为B5培养基改良的固体培养基。所述培养方法采用两步法培养油菜小孢子，第一步采用NLNM液体培养基培养，第二步采用固液双层培养基培养。本发明显著提高了子叶胚的得出率，而且保证了子叶胚的质量，进而提高小孢子培养获得双单倍体植株的效率。
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公开(公告)号：CN110438146A
公开(公告)日：2019-11-12
申请号：CN201910552468.4
申请日：2019-06-25
申请人： 武汉市农业科学院
摘要： 本发明提供了一种获得种子低硫苷含量的油菜品种的方法，利用CRISPR/Cas9编辑油菜硫苷转运基因GTR，具体为：筛选确定GTR基因编辑靶位点，根据CRISPR/Cas9载体和靶位点信息，合成多条引物，将引物构建至CRISPR/Cas9载体中，使油菜GTR基因发生突变从而抑制硫苷转运至油菜种子。该方法通过突变油菜的硫苷转运基因，获得了种子中硫苷含量低的油菜新品种，并且没有影响油菜叶片及茎秆中的硫苷含量，保证了油菜的抗病性，具有良好的应用前景。
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