公开(公告)号：CN101921867A

公开(公告)日：2010-12-22

申请号：CN201010276155.X

申请日：2010-09-09

Applicant: 武汉大学

Inventor： 毕延震 ,  张嘉农 ,  马钧

IPC: C12Q1/68

Abstract: 本发明属于生物化学与分子生物学领域，涉及一种新型PCR反应方法，依次包括如下步骤：1）兼容染料混合物的配制，所述兼容染料混合物由聚蔗糖400、甲酚红、柠檬黄和Gelred组成；2）PCR主体混合物的配制，所述主体混合物由兼容染料混合物、dNTP、TaqDNA聚合酶和反应缓冲液组成;3）PCR反应体系的配置；4）PCR反应条件的设定与运行；5）PCR产物的检测。本发明方法实现了PCR反应后的直接点样电泳和即时染色。此外，本发明使用了无毒的核酸染料，是一种低成本、高效率、无毒性的PCR反应新方法。使用本发明得到的PCR产物，可以直接进行多种下游操作如乙醇沉淀、硅胶膜产物纯化等。本发明方法适用于与PCR有关的基因表达检测、基因克隆等方面的研究。

公开(公告)号：CN101935661B

公开(公告)日：2012-01-18

申请号：CN201010278297.X

申请日：2010-09-10

Applicant: 武汉大学

Inventor： 张翼 ,  毕延震 ,  付向东 ,  姜黎 ,  马钧 ,  王龙

IPC: C12N15/113 ,  C12Q1/68 ,  C12Q1/02 ,  G01N21/64 ,  G01N15/10

Abstract: 本发明属于分子生物学领域，公开了一种沉默非编码癌基因H19 RNA表达的单链反义RNA及其效果检测方法。所述单链反义RNA是以H19 RNA的第五外显子的部分序列作为靶位点，设计并合成的23nt, 27nt, 31nt, 35nt,39nt单链反义RNA，其5’和3’均为羟基,不带有其它化学修饰。采用脂质体介导法转染人宫颈癌Hela细胞和人前列腺癌PC3细胞，sasRNA能够持久、高效、特异地抑制H19 RNA的表达。流式细胞检测sasRNA介导的H19 RNA表达水平的下调导致细胞周期阻滞于G2/M期。本发明的单链反义RNA效果明显，检测方法操作简便，成本低廉，具有广阔的应用前景。

公开(公告)号：CN101935661A

公开(公告)日：2011-01-05

申请号：CN201010278297.X

申请日：2010-09-10

Applicant: 武汉大学

Inventor： 张翼 ,  毕延震 ,  付向东 ,  姜黎 ,  马钧 ,  王龙

IPC: C12N15/113 ,  C12Q1/68 ,  C12Q1/02 ,  G01N21/64 ,  G01N15/10

Abstract: 本发明属于分子生物学领域，公开了一种沉默非编码癌基因H19RNA表达的单链反义RNA及其效果检测方法。所述单链反义RNA是以H19RNA的第五外显子的部分序列作为靶位点，设计并合成的23nt,27nt,31nt,35nt,39nt单链反义RNA，其5’和3’均为羟基,不带有其它化学修饰。采用脂质体介导法转染人宫颈癌Hela细胞和人前列腺癌PC3细胞，sasRNA能够持久、高效、特异地抑制H19RNA的表达。流式细胞检测sasRNA介导的H19RNA表达水平的下调导致细胞周期阻滞于G2/M期。本发明的单链反义RNA效果明显，检测方法操作简便，成本低廉，具有广阔的应用前景。

公开(公告)号：CN101921867B

公开(公告)日：2012-08-08

申请号：CN201010276155.X

申请日：2010-09-09

Applicant: 武汉大学

Inventor： 毕延震 ,  张嘉农 ,  马钧

IPC: C12Q1/68

Abstract: 本发明属于生物化学与分子生物学领域，涉及一种新型PCR反应方法，依次包括如下步骤：1）兼容染料混合物的配制，所述兼容染料混合物由聚蔗糖400、甲酚红、柠檬黄和Gelred组成；2）PCR主体混合物的配制，所述主体混合物由兼容染料混合物、dNTP、TaqDNA聚合酶和反应缓冲液组成；3）PCR反应体系的配置；4）PCR反应条件的设定与运行；5）PCR产物的检测。本发明方法实现了PCR反应后的直接点样电泳和即时染色。此外，本发明使用了无毒的核酸染料，是一种低成本、高效率、无毒性的PCR反应新方法。使用本发明得到的PCR产物，可以直接进行多种下游操作如乙醇沉淀、硅胶膜产物纯化等。本发明方法适用于与PCR有关的基因表达检测、基因克隆等方面的研究。