公开(公告)号：CN116084026A

公开(公告)日：2023-05-09

申请号：CN202211509700.4

申请日：2022-11-29

Applicant: 扬州大学

Inventor： 郑英 ,  周慧萍

IPC: C40B50/06 ,  C12N15/12 ,  C12N15/81 ,  C07K14/47 ,  G01N33/68

Abstract: 本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种筛选小鼠精子发生相关互作蛋白的方法及应用，通过提取小鼠单倍体生精细胞RNA反转录、扩增合成双链cDNA，并与pGADT7‑Rec共转化至Y187中构建酵母双杂交cDNA文库；扩增目的蛋白编码基因序列并构建诱饵质粒，与cDNA文库共培养后接种于营养缺失型培养基上，经多次铺板排除假阳性后挑取蓝色单克隆菌落进行PCR鉴定及测序，确认相互作用蛋白；构建的文库可应用于不同目的蛋白大批量、多次筛选小鼠精子发生相关蛋白；提供的筛选方法，可以同时大量获取目的蛋白的互作蛋白及其编码基因序列，为深入研究精子发生相关蛋白的功能及分子机制提供可能。

公开(公告)号：CN115960224A

公开(公告)日：2023-04-14

申请号：CN202211046613.X

申请日：2022-08-30

Applicant: 扬州大学

Inventor： 郑英 ,  周慧萍 ,  杨哲 ,  牛长敏

IPC: C07K16/18 ,  C12N15/12 ,  C07K14/47 ,  C12N15/70 ,  G01N33/68

Abstract: 本发明公开了一种兔抗小鼠Ccdc189多克隆抗体的制备方法，该方法首先进行原核蛋白表达重组质粒的构建，以Ccdc189真核表达质粒为模板，利用引物进行PCR扩增，扩增产物与pGEM‑T‑Easy载体连接，连接产物转化入大肠杆菌得到pGEM‑T‑Easy‑Ccdc189质粒，酶切后连接pET‑28a（+）质粒，转化大肠杆菌得到pET‑28a‑Ccdc189重组质粒；然后进行原核蛋白的诱导表达与纯化，将pET‑28a‑Ccdc189重组质粒转入感受态细胞，诱导纯化得到Ccdc189蛋白；最后进行Ccdc多克隆抗体的制备，以Ccdc189蛋白为免疫原，对兔进行免疫，得到兔抗鼠Ccdc多克隆抗体。