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公开(公告)号:CN115044612A
公开(公告)日:2022-09-13
申请号:CN202210699860.3
申请日:2022-06-20
Applicant: 岭南现代农业科学与技术广东省实验室肇庆分中心
Abstract: 本发明公开了一种非洲猪瘟病毒p72蛋白稳定表达细胞系及其构建方法,在将p72蛋白完成序列改造得到重组蛋白后,分别将其克隆至原核表达载体、真核表达载体,分别进行原核表达、真核表达和;其中,在原核表达的过程中,能得到稳定表达p72重组蛋白的大肠杆菌以及能得到纯化后的p72重组蛋白;经过真核表达后,能得到稳定表达p72重组蛋白的CHO细胞株。利用本发明的构建方法能在2个月内筛选获得表达非洲猪瘟病毒p72蛋白的CHO细胞株,并在没有嘌呤霉素筛选压力下,细胞系传至20代,仍可检测到外源重组蛋白,成功率为90%,具有试验周期短、成功率高和表达成本低的优点。
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公开(公告)号:CN115197961B
公开(公告)日:2024-04-16
申请号:CN202210698321.8
申请日:2022-06-20
Applicant: 岭南现代农业科学与技术广东省实验室肇庆分中心
IPC: C12N15/85 , C12N15/34 , C12N5/10 , G01N33/569 , C12R1/91
Abstract: 本发明公开了一种非洲猪瘟病毒B602L重组蛋白稳定表达细胞系及其构建方法和应用,在将B602L重组蛋白完成序列改造后,将其克隆至真核表达载体,进行真核表达,经过筛选能得到稳定表达B602L重组蛋白的CHO细胞株。利用本发明的构建方法能在1个月内筛选获得表达非洲猪瘟病毒B602L重组蛋白的CHO细胞株,并在没有G418筛选压力下,细胞系传至20代,仍可检测到外源重组蛋白,具有试验周期短、成功率高和表达成本低的优点。
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公开(公告)号:CN115197961A
公开(公告)日:2022-10-18
申请号:CN202210698321.8
申请日:2022-06-20
Applicant: 岭南现代农业科学与技术广东省实验室肇庆分中心
IPC: C12N15/85 , C12N15/34 , C12N5/10 , G01N33/569 , C12R1/91
Abstract: 本发明公开了一种非洲猪瘟病毒B602L重组蛋白稳定表达细胞系及其构建方法和应用,在将B602L重组蛋白完成序列改造后,将其克隆至真核表达载体,进行真核表达,经过筛选能得到稳定表达B602L重组蛋白的CHO细胞株。利用本发明的构建方法能在1个月内筛选获得表达非洲猪瘟病毒B602L重组蛋白的CHO细胞株,并在没有G418筛选压力下,细胞系传至20代,仍可检测到外源重组蛋白,具有试验周期短、成功率高和表达成本低的优点。
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公开(公告)号:CN115044613A
公开(公告)日:2022-09-13
申请号:CN202210699886.8
申请日:2022-06-20
Applicant: 岭南现代农业科学与技术广东省实验室肇庆分中心
IPC: C12N15/85 , C12N15/66 , C12N15/62 , C12N15/34 , C12N5/10 , C12P21/02 , G01N33/68 , G01N33/569 , C12R1/91
Abstract: 本发明公开了一种表达猪圆环病毒cap蛋白的基因工程细胞系及其构建方法和应用,通过对猪圆环病毒cap蛋白核酸序列进行优化合成,克隆至pCMV载体上构建真核表达质粒pCMV‑PCV2cap,通过转染CHO细胞,再经加压筛选获得。本发明将构建的pTT5‑PCV2cap质粒瞬转到293T细胞,提供了一种间接ELISA的方法检测PCV2。本发明利用基因工程技术通过哺乳动物细胞表达系统构建了一种表达猪圆环病毒cap蛋白的细胞系,该细胞系具有与亲本细胞相似的生物特性,表达的重组蛋白能用于PCV2血清学诊断用抗原的研究,对于PCV2的诊断和疫苗生产具有非常重要的意义。
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