公开(公告)号：CN115572731A

公开(公告)日：2023-01-06

申请号：CN202210921282.3

申请日：2022-08-02

Applicant: 岭南现代农业科学与技术广东省实验室

Inventor： 孙坚 ,  龙腾飞 ,  陈彩萍 ,  黄紫蕾 ,  何玉张 ,  廖晓萍 ,  刘雅红

IPC: C12N15/74 ,  C12N15/66 ,  C12N15/65 ,  C12N1/21 ,  C12Q1/02 ,  G01N21/76 ,  C12R1/445

Abstract: 本发明属于基因工程技术领域，具体公开了一种基于Tn558转座子构建的能表达荧光的自杀型质粒、构建方法及应用。该自杀型质粒的构建方法包括：将Tn558和sfGFP进行重叠PCR得到Tn558::sfGFP片段，该片段与用BamHI单酶切后的线性化质粒pZ‑oriTRP4进行重组得到最终的自杀质粒pTn558‑GFP‑oriTRP4。将上述自杀质粒转化至大肠杆菌WM3064感受态细胞，得到大肠杆菌供体菌，可将其与金黄色葡萄球菌受体菌株共培养，构建金黄色葡萄球菌荧光菌株。本发明构建的基于金黄色葡萄球菌染色体radc基因定点荧光标记菌株方法效率较高，可用于构建耐药荧光菌株、药动药效学评价或筛选药物中。