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公开(公告)号：CN109609445A
公开(公告)日：2019-04-12
申请号：CN201910014453.2
申请日：2019-01-07
Applicant: 安徽农业大学
IPC: C12N5/073
Abstract: 本发明公开了一种囊胚中单个卵裂球的分离方法，包括如下步骤：口吸针的制备；分离针的制备；链霉蛋白酶和胰蛋白酶的准备；囊胚透明带的去除；囊胚单个卵裂球的分离收缩后的囊胚置于50μL的胰蛋白酶液滴中温育40min，温育后，先用细口口吸针将囊胚移入1g/L的BSA液滴中洗净后，用细口口吸针快速吹吸将囊胚吹散开，直到有一些细胞团无法通过吹吸进行分离，再用分离针的细段部分将细胞团中的单个细胞分开即可，本发明采用胰蛋白酶分离囊胚单卵裂球，细胞形态完整，细胞之间间隔分明，发明所需试剂耗材容易获得，经济，发明步骤简单易行，是一种可广泛推广的简单经济有效的实用方法。
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公开(公告)号：CN107422128A
公开(公告)日：2017-12-01
申请号：CN201710229608.5
申请日：2017-04-10
Applicant: 安徽农业大学
IPC: G01N33/68 , G01N33/561
CPC classification number: G01N33/6803 , G01N33/561
Abstract: 本发明属于蛋白检测领域，具体涉及一种卵母细胞中蛋白的检测方法，包括如下步骤：S1，蛋白样的提取；S2，SDS-PAGE凝胶电泳流程；S3，转膜；S4，封闭；S5，孵育一抗；S6，孵育二抗；S7，显影。所述蛋白样的提取过程中添加玻璃珠用于充分提取蛋白的方法以及显影过程中自封袋的巧妙运用。相比以往的技术方法，本方法在卵母细胞样的处理方式和显影环节的优化方面实施了创造性的发明和改进，因此显著提高了蛋白检测的效率。本方法通过少量试验材料就能检测低丰度蛋白的方案，检测内参蛋白只需要1个卵母细胞就能测出条带，对于表达丰度较低的蛋白质需要40个左右就能出较清晰的条带，相比现有技术需要不低于200个卵母细胞，效率显著提高。
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公开(公告)号：CN107422128B
公开(公告)日：2020-06-09
申请号：CN201710229608.5
申请日：2017-04-10
Applicant: 安徽农业大学
IPC: G01N33/68 , G01N33/561
Abstract: 本发明属于蛋白检测领域，具体涉及一种卵母细胞中蛋白的检测方法，包括如下步骤：S1，蛋白样的提取；S2，SDS‑PAGE凝胶电泳流程；S3，转膜；S4，封闭；S5，孵育一抗；S6，孵育二抗；S7，显影。所述蛋白样的提取过程中添加玻璃珠用于充分提取蛋白的方法以及显影过程中自封袋的巧妙运用。相比以往的技术方法，本方法在卵母细胞样的处理方式和显影环节的优化方面实施了创造性的发明和改进，因此显著提高了蛋白检测的效率。本方法通过少量试验材料就能检测低丰度蛋白的方案，检测内参蛋白只需要1个卵母细胞就能测出条带，对于表达丰度较低的蛋白质需要40个左右就能出较清晰的条带，相比现有技术需要不低于200个卵母细胞，效率显著提高。
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公开(公告)号：CN110214776A
公开(公告)日：2019-09-10
申请号：CN201910585668.X
申请日：2019-07-01
Applicant: 安徽农业大学
Abstract: 本发明公开了一种基于麦管冷冻Tip载体的猪囊胚的冻存和解冻方法，通过S1基于麦管制作的胚胎玻璃化冷冻Tip载体的制备、S2冷冻Tip载体的猪囊胚的冻存、S3冷冻Tip载体的猪囊胚的解冻等步骤，从而实现猪囊胚的高效冻存和解冻。本发明一种基于麦管冷冻Tip载体的猪囊胚的冻存和解冻方法，技术简单，操作便捷，不需要操作人员多大的熟练度，成本低、效率高，显著降低胚胎玻璃化冷冻与解冻过程中的胚胎损伤和丢失的发生率，可以很好地应用于人类生殖医学和畜牧业的推广发展。
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公开(公告)号：CN109554484A
公开(公告)日：2019-04-02
申请号：CN201811552309.6
申请日：2018-12-19
Applicant: 安徽农业大学
IPC: C12Q1/6888
Abstract: 本发明公开了一种快速检测猪胚胎全基因组转录活性的方法。包括如下步骤：将卵母细胞或各期胚胎放入有含有2mM EU的预热的完全培养基中孵育；卵母细胞或各期胚胎样品收集。将与EU共孵育过后的卵母细胞或各期胚胎进行固定、通透；“click”反应标记荧光染料。将与EU共孵育、固定、通透后的卵母细胞或各期胚胎放入Click-iT reaction cocktail中孵育30min，使其标记上荧光染料。将带有荧光染料卵母细胞或各期胚胎进行压片、封片。EU染色可以大大缩短的检测时间且操作简单、方便、快捷，是一种理想的快速检测猪胚胎全基因组转录活性的方法。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN109402220A
公开(公告)日：2019-03-01
申请号：CN201811470251.0
申请日：2018-11-28
Applicant: 安徽农业大学
IPC: C12Q1/24
Abstract: 本发明公开了一种收集囊胚腔液体的方法，包括如下步骤：显微操作针的准备，用拉针仪，断针仪和磨针仪制作内径为10μm的注射针以及针口为40μm的固定针，注射针要将针尖拔尖；囊胚腔液体的收集，在显微操作仪下，用固定针固定住内细胞团一侧，用注射针刺入囊胚腔中吸取囊胚腔中的液体至于1μLDPBS液滴中，收集完成后用较细的口吸针将囊胚腔中的液体转移到进口200μL的离心管中；囊胚腔液体中DNA含量的检测。这种收集方法采用自制的较细的注射针易刺破囊胚腔，对囊胚后续发育所产生的影响较小，且较为精准，可以收集单个囊胚腔中的液体，为胚胎植入前遗传学筛查提供新的方法。
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公开(公告)号：CN110016483A
公开(公告)日：2019-07-16
申请号：CN201910315164.6
申请日：2019-04-18
Applicant: 安徽农业大学
IPC: C12N15/867 , G01N21/64
Abstract: 本发明公开了一种研究卵母细胞体外成熟中卵丘细胞基因功能的方法，包括如下步骤：成熟碟的制备：取20.83uL成熟液于200uL离心管中，再加入1uL慢病毒，吹打混匀；将混匀后的成熟液在培养皿中做培养滴，并加入3mL矿物油，将培养皿放在培养箱平衡3-5h；慢病毒转染COCs：从卵泡中的挑选出COCs，再用成熟液IVM将COCs清洗三遍；把清洗好的COCs转染30-50h，本发明的慢病毒转染卵丘-卵母细胞复合物来发明卵母细胞成熟中卵丘基因功能的方法，通过慢病毒转染实现干扰卵丘细胞中目的基因或蛋白的表达，有效地解决卵丘细胞不能进行显微注射的问题，又能很好地发挥卵丘基因在卵母细胞成熟过程中发挥的作用。
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公开(公告)号：CN109975264A
公开(公告)日：2019-07-05
申请号：CN201910315163.1
申请日：2019-04-18
Applicant: 安徽农业大学
Abstract: 本发明公开了一种慢病毒转染囊胚滋养层细胞研究其基因功能的方法，包括如下步骤：培养碟的制备：取20.83uL胚胎培养液置于离心管中，加入1uL慢病毒，吹打混匀；再将胚胎培养液在培养皿中做培养滴，并加入3mL矿物油，将培养皿放在培养箱平衡3‑5h。慢病毒转染囊胚：用胚胎培养液将去除透明带后的囊胚清洗干净；清洗好的囊胚置于培养碟中，转染10‑14h；用DPBS液体将囊胚清洗干净，并用4％PFA固定10‑30min，再用DPBS清洗干净；DAPI染核，压片。本发明通过慢病毒转染实现干扰滋养层细胞中目的基因表达，从而有效地解决滋养层细胞中基因不能敲低或过表达的问题。
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公开(公告)号：CN109112182A
公开(公告)日：2019-01-01
申请号：CN201811027188.3
申请日：2018-09-04
Applicant: 安徽农业大学
IPC: C12Q1/6806 , C12Q1/6851
Abstract: 本发明公开了一种猪单个卵母细胞基因定量表达的方法，通过S1：引物池的准备、S2：逆转录反应体系的配置、S3：PCR聚合酶链式反应、S4：模版DNA稀释、S5：qPCR定量聚合酶链式反应等步骤，从而实现猪单个卵母细胞的基因定量表达。本发明，采用单细胞定量PCR，实现了RNA提取纯化、逆转录和PCR反应在同一管内完成，不需额外操作，具有减少试验误差、降低污染、提高灵敏度等优势；使用单个细胞进行定量PCR，大大减少了样品需求量，缩短了时间和精力，降低了花费，同时也解决了定量PCR技术在珍贵样品中应用的局限性。本发明方法，操作简单，成本低，误差小，准确度高，效果好。
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公开(公告)号：CN108925550A
公开(公告)日：2018-12-04
申请号：CN201811027186.4
申请日：2018-09-04
Applicant: 安徽农业大学
IPC: A01N1/02
Abstract: 本发明公开了一种简单经济高效的精液运输方法，包括如下步骤：17℃保温瓶的准备，将热水倒入保温瓶，缓慢加入凉水，直至保温瓶内的水温稳定在17℃，盖好盖子备用；精液的运输，将从猪场刚取出的精液装入精液瓶中；对保温瓶内的水温进行再次确认及微调；将精液瓶放入17℃保温瓶中，确保水可以没过精液瓶的瓶身，再将装有精液的保温瓶放在温度为23.8-24.2℃的车内，并于2h内运回实验室。这种运输方法可以保证在17℃下，精子仍具有较好的精子活力，可以有效地减少精子的死亡和损失，可以在较低的经济成本下保证精液的品质，是一种理想的精液运输方法。
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