公开(公告)号：CN111663006A

公开(公告)日：2020-09-15

申请号：CN201910670632.1

申请日：2019-07-24

Applicant: 安徽农业大学

Inventor： 王勇 ,  张达 ,  白彩霞 ,  王小朋 ,  赵靓 ,  杨侃侃 ,  俞赵荣

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/6844 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一种检测猪细小病毒7型的环介导等温扩增方法的引物组，包括一对外引物、一对内引物和一对环引物，其中所述一对外引物包括F3和B3；所述一对内引物包括FIP和BIP；所述一对环引物LF和LB；本发明进一步公开了一种包含上述引物组的试剂盒，该试剂盒包括所述引物组、等温扩增反应缓冲液、Bst 2.0WarmStart DNA聚合酶、dNTP Mix、MgSO4、超纯水和荧光显色检测试剂。本发明提供一种猪细小病毒7型环介导等温扩增检测引物组及其试剂盒，本发明污染小，操作简便、快速、可用肉眼直接观察结果。具有特异性强、灵敏度高等优点，无需昂贵仪器设备，尤其便于基层使用。

公开(公告)号：CN111690769A

公开(公告)日：2020-09-22

申请号：CN201910670437.9

申请日：2019-07-24

Applicant: 安徽农业大学

Inventor： 王勇 ,  赵靓 ,  王小朋 ,  杨侃侃 ,  张达 ,  白彩霞 ,  孙裴

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/6851

Abstract: 本发明公开了一种猪细小病毒7型SYBR Green I荧光定量PCR检测方法，包括如下步骤：S1、制备特异性引物；根据Gen Bank登录的PPV7(Gen Bank:KU563733.1)Cap基因核苷酸序列，设计用于PPV7的特异性引物(F1、R1)；PPV7特异性引物上游引物F1：PPV7-F1(5'-GCGACCAGTCGAAAGTCTTC-3')，PPV7特异性引物下游引物R1：PPV7-R1(5'-TTGGTGTTGCCCATTCTGTA-3')，扩增核酸片段大小为169bp；S2、重组质粒标准品制备并提取DNA；本发明为建立一种能够快速、特异、敏感、简便、特异性好的检测猪细小病毒7型的SYBR Green I荧光定量PCR方法，本发明根据Gen Bank登录的PPV7(Gen Bank:KU563733.1)Cap基因核苷酸序列，设计一对用于PPV7的特异性引物，扩增169bp的PPV7衣壳蛋白基因，构建重组质粒，以其作为标准品建立了SYBR Green I荧光定量PCR检测方法，得到标准曲线、溶解曲线，并对灵敏性、特异性和重复性进行验证。

公开(公告)号：CN112410466A

公开(公告)日：2021-02-26

申请号：CN202010798302.3

申请日：2020-08-07

Applicant: 安徽农业大学

Inventor： 王勇 ,  张达 ,  白彩霞 ,  李叶秋 ,  崔佣楸

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/6851 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明通过建立一种猪圆环病毒2型和猪圆环病毒4型双重实时荧光定量PCR引物组、探针及检测方法，该发明属于病毒分子生物学检测领域。该方法可快速检测猪圆环病毒2型和猪圆环病毒4型。该方法简单快速，对单个样本检测时间为60分钟，其灵敏度可达10拷贝数/ul，针对较大的样本量可做到同时检测，具有良好的灵敏性、重复性、特异性以及稳定性，可实现对猪圆环病毒2型和猪圆环病毒4型快速准确检测的目的。

公开(公告)号：CN111663005A

公开(公告)日：2020-09-15

申请号：CN201910670449.1

申请日：2019-07-24

Applicant: 安徽农业大学

Inventor： 王勇 ,  白彩霞 ,  张达 ,  赵靓 ,  王小朋 ,  杨侃侃 ,  俞赵荣

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/6851

Abstract: 本发明公开了一种用于检测猪细小病毒6型的荧光定量PCR方法，包括如下步骤：S1、制备特异性引物；根据GenBank PPV6的Cap基因序列，登录号：KU563733.1，应用Primer Premier5.0软件设计一对特异性引物如下：F：5’-GAAAAAGAACAGGCGCAGAC-3’，R：5’-GGGATTATGAAGCCAGACG-3’；S2、重组质粒标准品制备并提取DNA；取适量采集的淋巴结、脾、肺等组织加入含青霉素和链霉素各1000IU/ml的PBS匀浆用研钵充分碾磨；反复冻融3次，6000r/min离心10min，取上清液，置于-80℃冰箱待用；将制备好的样品按照DNA/RNA提取试剂盒使用说明书提取DNA；本发明提供一种能够快速、简便、灵敏地检测猪细小病毒6型的方法；本发明根据Cap基因设计特异性引物，建立了一种基于SYBR Green I的real-time荧光定量PCR检测方法。