公开(公告)号：CN110257539B

公开(公告)日：2023-07-25

申请号：CN201910614546.9

申请日：2019-07-09

Applicant: 宁夏大学

Inventor： 李敏 ,  郝秀静 ,  金华 ,  马春骥 ,  王玉炯

IPC: C12Q1/689 ,  C12Q1/6816 ,  C12Q1/04 ,  C12N15/11 ,  C12R1/35

Abstract: 本发明公开用于快速检测绵羊肺炎支原体的组合物、试剂盒和方法。本发明通过设计绵羊肺炎支原体的转酮醇酶基因的特异性引物、探针，完成了绵羊肺炎支原体的精确检测。本发明对检测过程中最佳反应时间与最佳反应温度、检测的特异性、敏感性、重复性和稳定性均进行了探索，找到了最佳反应条件，建立了特异性好、敏感性高且可以稳定重复的绵羊肺炎支原体快速检测方法，具有操作简单，便捷省时，无需大型的实验仪器设备，非常适合没有任何实验基础的人员操作，实现现场检测。

公开(公告)号：CN109762835B

公开(公告)日：2021-04-23

申请号：CN201811322699.8

申请日：2018-11-08

Applicant: 宁夏大学

Inventor： 李敏 ,  郝秀静 ,  马春骥 ,  罗海霞 ,  金华 ,  韩杨

IPC: C12N15/70 ,  C40B50/06 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开驼源纳米抗体基因库的构建方法，其包括以下步骤：(1)免疫步骤：利用第一抗原体系首次免疫骆驼，然后利用第二抗原体系加强免疫骆驼，得到免疫后的骆驼，采取其血液；(2)扩增步骤：提取血液中淋巴细胞的总RNA，逆转录为cDNA，以其作为模板扩增重链抗体可变区的基因片段，其中基因片段至少包括来自IgG2和IgG3的片段；(3)转化步骤：将基因片段克隆至宿主细胞，得到驼源纳米抗体基因库。本发明的构建方法能够获得更大库容的基因库。

公开(公告)号：CN110564877A

公开(公告)日：2019-12-13

申请号：CN201910871216.8

申请日：2019-09-16

Applicant: 宁夏大学

Inventor： 李敏 ,  郝秀静 ,  金华 ,  马春骥 ,  王玉炯

IPC: C12Q1/689 ,  C12Q1/04 ,  C12N15/11 ,  C12R1/35

Abstract: 本发明公开以转酮醇酶基因为靶标检测绵羊肺炎支原体的组合物、试剂盒和方法。本发明的组合物的检测靶标为绵羊肺炎支原体的转酮醇酶基因，可以针对该基因中的多种不同片段，并且通过实验验证了本发明的组合物可设计出多种不同具体组合情形以应用于传统PCR、basic RPA、nfo RPA和exo RPA等多种扩增方法，另外可借助琼脂糖凝胶电泳、侧流层析试纸条以及恒温荧光扩增仪来观察实验结果。本发明对检测过程中最佳反应时间与最佳反应温度、检测的特异性、敏感性、重复性和稳定性均进行了探索，找到了最佳反应条件，建立了特异性好、敏感性高且可以稳定重复的绵羊肺炎支原体快速检测方法，具有操作简单，便捷省时，无需大型的实验仪器设备。

公开(公告)号：CN110257539A

公开(公告)日：2019-09-20

申请号：CN201910614546.9

申请日：2019-07-09

Applicant: 宁夏大学

Inventor： 李敏 ,  郝秀静 ,  金华 ,  马春骥 ,  王玉炯

IPC: C12Q1/689 ,  C12Q1/6816 ,  C12Q1/04 ,  C12N15/11 ,  C12R1/35

Abstract: 本发明公开用于快速检测绵羊肺炎支原体的组合物、试剂盒和方法。本发明通过设计绵羊肺炎支原体的转酮醇酶基因的特异性引物、探针，完成了绵羊肺炎支原体的精确检测。本发明对检测过程中最佳反应时间与最佳反应温度、检测的特异性、敏感性、重复性和稳定性均进行了探索，找到了最佳反应条件，建立了特异性好、敏感性高且可以稳定重复的绵羊肺炎支原体快速检测方法，具有操作简单，便捷省时，无需大型的实验仪器设备，非常适合没有任何实验基础的人员操作，实现现场检测。

公开(公告)号：CN110564877B

公开(公告)日：2023-04-21

申请号：CN201910871216.8

申请日：2019-09-16

Applicant: 宁夏大学

Inventor： 李敏 ,  郝秀静 ,  金华 ,  马春骥 ,  王玉炯

IPC: C12Q1/689 ,  C12Q1/04 ,  C12N15/11 ,  C12R1/35

Abstract: 本发明公开以转酮醇酶基因为靶标检测绵羊肺炎支原体的组合物、试剂盒和方法。本发明的组合物的检测靶标为绵羊肺炎支原体的转酮醇酶基因，可以针对该基因中的多种不同片段，并且通过实验验证了本发明的组合物可设计出多种不同具体组合情形以应用于传统PCR、basic RPA、nfo RPA和exo RPA等多种扩增方法，另外可借助琼脂糖凝胶电泳、侧流层析试纸条以及恒温荧光扩增仪来观察实验结果。本发明对检测过程中最佳反应时间与最佳反应温度、检测的特异性、敏感性、重复性和稳定性均进行了探索，找到了最佳反应条件，建立了特异性好、敏感性高且可以稳定重复的绵羊肺炎支原体快速检测方法，具有操作简单，便捷省时，无需大型的实验仪器设备。

公开(公告)号：CN109762835A

公开(公告)日：2019-05-17

申请号：CN201811322699.8

申请日：2018-11-08

Applicant: 宁夏大学

Inventor： 李敏 ,  郝秀静 ,  马春骥 ,  罗海霞 ,  金华 ,  韩杨

IPC: C12N15/70 ,  C40B50/06 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开驼源纳米抗体基因库的构建方法，其包括以下步骤：(1)免疫步骤：利用第一抗原体系首次免疫骆驼，然后利用第二抗原体系加强免疫骆驼，得到免疫后的骆驼，采取其血液；(2)扩增步骤：提取血液中淋巴细胞的总RNA，逆转录为cDNA，以其作为模板扩增重链抗体可变区的基因片段，其中基因片段至少包括来自IgG2和IgG3的片段；(3)转化步骤：将基因片段克隆至宿主细胞，得到驼源纳米抗体基因库。本发明的构建方法能够获得更大库容的基因库。