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公开(公告)号：CN103088064B
公开(公告)日：2015-04-15
申请号：CN201210556854.9
申请日：2012-12-19
Applicant: 复旦大学附属中山医院
IPC: C12N15/867 , C12N15/113 , C12N15/66 , A61K48/00 , A61P35/00
Abstract: 本发明提供了一种肝癌组织特异性RNA干扰系统及其建立和应用方法。所述的肝癌组织特异性RNA干扰系统由AFP-Cre载体和LoxP-shRNA载体组成，AFP-Cre载体和LoxP-shRNA载体均由慢病毒载体构建而成，其中，AFP-Cre载体含有一个AFP启动子和位于其下游的Cre重组酶基因，LoxP-shRNA载体含有一个经过改造的U6启动子和位于其下游的shRNA序列，LoxP-shRNA载体中所含的经过改造的U6启动子为在U6启动子中插入一个可指示AFP-Cre/LoxP-shRNA系统是否工作的结构的U6启动子，所述的可指示AFP-Cre/LoxP-shRNA系统是否工作的结构为LoxP-CMV-eGFP-LoxP。应用本发明获得的RNA干扰作用具有肝癌组织特异性高、作用长效、高效、指示良好、操作简便等特点。本发明使肝癌RNA干扰靶向治疗成为可能，并极大地方便了相关研究分析，可广泛应用于肝癌治疗及基础研究。
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公开(公告)号：CN103088064A
公开(公告)日：2013-05-08
申请号：CN201210556854.9
申请日：2012-12-19
Applicant: 复旦大学附属中山医院
IPC: C12N15/867 , C12N15/113 , C12N15/66 , A61K48/00 , A61P35/00
Abstract: 本发明提供了一种肝癌组织特异性RNA干扰系统及其建立和应用方法。所述的肝癌组织特异性RNA干扰系统由AFP-Cre载体和LoxP-shRNA载体组成，AFP-Cre载体和LoxP-shRNA载体均由慢病毒载体构建而成，其中，AFP-Cre载体含有一个AFP启动子和位于其下游的Cre重组酶基因，LoxP-shRNA载体含有一个经过改造的U6启动子和位于其下游的shRNA序列，LoxP-shRNA载体中所含的经过改造的U6启动子为在U6启动子中插入一个可指示AFP-Cre/LoxP-shRNA系统是否工作的结构的U6启动子，所述的可指示AFP-Cre/LoxP-shRNA系统是否工作的结构为LoxP-CMV-eGFP-LoxP。应用本发明获得的RNA干扰作用具有肝癌组织特异性高、作用长效、高效、指示良好、操作简便等特点。本发明使肝癌RNA干扰靶向治疗成为可能，并极大地方便了相关研究分析，可广泛应用于肝癌治疗及基础研究。
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公开(公告)号：CN102115730A
公开(公告)日：2011-07-06
申请号：CN201010295088.6
申请日：2010-09-29
Applicant: 复旦大学附属中山医院
Abstract: 本发明属生物医学领域，旨在提供稳定指示自噬的高转移潜能肝癌细胞株及其建立和应用方法。本发明通过构建含有EGFP-LC3自噬报告基因的慢病毒表达载体，并使用该表达载体感染具有高转移潜能的肝癌细胞，使宿主细胞稳定高效表达EGFP-LC3，稳定指示细胞自噬变化。应用该细胞株可以于体外和体内建立转移研究模型，观察自噬在转移中的改变，并采用基于Top-hat算子和形态滤波的图像分析方法快速定量分析细胞自噬改变。本发明具有自噬指示稳定可靠、实时灵敏、转移发生确切，自噬定量快速准确、操作简便等特点，可极大地方便自噬与转移的相关研究。
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公开(公告)号：CN101892265A
公开(公告)日：2010-11-24
申请号：CN201010198727.7
申请日：2010-06-12
Applicant: 复旦大学附属中山医院
Abstract: 本发明属于生物医学领域，旨在提供一种稳定指示细胞自噬活动的表达载体及其建立和应用方法。本发明通过构建含有EGFP-LC3自噬报告基因的慢病毒表达质粒，采用四质粒系统，建立能够使细胞稳定表达EGFP-LC3基因的慢病毒表达载体。使用该表达载体感染宿主细胞，可将EGFP-LC3基因稳定整合入宿主细胞基因组，使宿主细胞稳定高效表达EGFP-LC3，指示细胞自噬变化。应用该表达载体可建立稳定的自噬指示细胞，并采用基于Top-hat算子和形态滤波的图像分析方法快速定量分析细胞自噬改变。本发明具有自噬指示稳定可靠、实时灵敏、自噬定量快速准确、操作简便等特点，极大地方便了自噬观察分析，可广泛应用于自噬相关研究。
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