公开(公告)号：CN101348787B

公开(公告)日：2011-09-07

申请号：CN200810044409.8

申请日：2008-05-19

Applicant: 四川农业大学

Inventor： 杨光友 ,  何光志 ,  汪涛 ,  彭雪蓉

IPC: C12N15/12 ,  C12N15/70 ,  C07K14/435 ,  A61K48/00 ,  A61P33/10 ,  G01N33/53

Abstract: 本发明公开了大熊猫西氏蛔虫抗原的制备及其应用，属大熊猫西氏蛔虫的防治及检测领域。包括设计出西氏蛔虫抗原基因引物；采用RT-PCR法将蛔虫总RNA逆转录合成cDNA，再以cDNA为模板，PCR扩增出目的产物；将纯化的目的产物与pMD18-T载体连接，转至DH5α，感受态细菌；经平板筛选培养，选取阳性重组克隆，培养后测序出抗原基因为Bs-Ag1基因、Bs-Ag2基因、Bs-Ag3基因。再进行重组质粒构建、诱导表达和重组蛋白纯化，将测序正确的重组质粒，转化到大肠杆菌BL21感受态细胞，进行蛋白的大量表达。其产物经检测、免疫试验以及对试验动物抗体IgG的ELISA检测分析：大熊猫西氏蛔虫抗原Bs-Ag1、Bs-Ag2和Bs-Ag3基因可以作为蛔虫制备基因工程疫苗的侯选基因，其重组蛋白Bs-Ag1、Bs-Ag2和Bs-Ag3具有良好的反应原性，可以用来构建以ELISA方法检测感染大熊猫蛔虫。

公开(公告)号：CN101348787A

公开(公告)日：2009-01-21

申请号：CN200810044409.8

申请日：2008-05-19

Applicant: 四川农业大学

Inventor： 杨光友 ,  何光志 ,  汪涛 ,  彭雪蓉

IPC: C12N15/12 ,  C12N15/70 ,  C07K14/435 ,  A61K48/00 ,  A61P33/10 ,  G01N33/53

Abstract: 本发明公开了大熊猫西氏蛔虫抗原的制备及其应用，属大熊猫西氏蛔虫的防治及检测领域。包括设计出西氏蛔虫抗原基因引物；采用RT－PCR法将蛔虫总RNA逆转录合成cDNA，再以cDNA为模板，PCR扩增出目的产物；将纯化的目的产物与pMD18－T载体连接，转至DH5α，感受态细菌；经平板筛选培养，选取阳性重组克隆，培养后测序出抗原基因为Bs－Ag1基因、Bs－Ag2基因、Bs－Ag3基因。再进行重组质粒构建、诱导表达和重组蛋白纯化，将测序正确的重组质粒，转化到大肠杆菌BL21感受态细胞，进行蛋白的大量表达。其产物经检测、免疫试验以及对试验动物抗体IgG的ELISA检测分析：大熊猫西氏蛔虫抗原Bs－Ag1、Bs－Ag2和Bs－Ag3基因可以作为蛔虫制备基因工程疫苗的侯选基因，其重组蛋白Bs－Ag1、Bs－Ag2和Bs－Ag3具有良好的反应原性，可以用来构建以ELISA方法检测感染大熊猫蛔虫。