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公开(公告)号:CN102120985A
公开(公告)日:2011-07-13
申请号:CN201010599706.6
申请日:2010-12-22
Applicant: 同济大学
IPC: C12N5/0775
Abstract: 本发明涉及一种高效分离培养原代兔骨髓间充质干细胞的方法。用具体步骤如下:将实验动物打空气栓塞处死后经酒精浸泡15-20min消毒后,置入超净工作台内分离四肢骨,经PBS和DMEM培养液反复冲洗后,剪去骨两端,用含有肝素的DMEM液冲洗骨髓腔;肝素浓度为625U/ml;分别用不同直径大小的注射器针过滤步骤(1)中获取的骨髓液,制成单细胞悬液后缓慢注入含有等体积Percoll的离心管中,离心20分钟,收集中间云雾状细胞层,再以LG-DMEM液洗涤细胞,离心5min,重复洗涤2-3遍;将洗涤好的细胞加入含有适量比例双抗(1%)且包含10%胎牛血清的LG-DMEM液,吹打成细胞悬液,计数并调整细胞密度为1×108/L接种于25cm2塑料培养瓶中,置于37℃、5%的CO2培养箱中培养。本发明能够简便有效的高效分离培养原代兔骨髓间充质干细胞,为进一步的基础实验以及临床研究做准备。