公开(公告)号：CN114457105B

公开(公告)日：2024-07-16

申请号：CN202210031716.2

申请日：2022-01-12

Applicant: 厦门大学

Inventor： 甘礼惠 ,  薛勇 ,  宋阳 ,  刘健 ,  龙敏南 ,  曾宪海

IPC: C12N15/80 ,  C12N15/57 ,  C12N15/113 ,  C12N1/15 ,  C12R1/885

Abstract: 本发明涉及微生物技术领域，特别涉及一种载体骨架、基于该载体骨架和东方肉座菌低背景工程菌株的定位表达系统及应用。其中，载体骨架基因序列如SEQ ID NO.1所示，包括东方肉座菌△xyr1‑3的天冬氨酸蛋白水解酶上下游同源臂、抗性标记基因表达盒和目的基因表达盒插入的酶切位点，方便不同基因的表达和突变研究，如蛋白酶在该系统的表达和突变研究。本发明构建的基于载体骨架pUC‑ASPG和东方肉座菌胞外蛋白低背景工程菌株的定位表达系统，通过敲除xyr1基因后，菌株△xyr1‑3在诱导条件下基本不表达纤维素酶和半纤维素酶，消除了纤维素酶和半纤维素酶的本底表达，使东方肉座菌△xyr1‑3适合于纤维素酶、半纤维素酶及其它真菌分泌蛋白的表达和突变研究。

公开(公告)号：CN114457105A

公开(公告)日：2022-05-10

申请号：CN202210031716.2

申请日：2022-01-12

Applicant: 厦门大学

Inventor： 甘礼惠 ,  薛勇 ,  宋阳 ,  刘健 ,  龙敏南 ,  曾宪海

IPC: C12N15/80 ,  C12N15/57 ,  C12N15/113 ,  C12N1/15 ,  C12R1/885

Abstract: 本发明涉及微生物技术领域，特别涉及一种载体骨架、基于该载体骨架和东方肉座菌低背景工程菌株的定位表达系统及应用。其中，载体骨架基因序列如SEQ ID NO.1所示，包括东方肉座菌△xyr1‑3的天冬氨酸蛋白水解酶上下游同源臂、抗性标记基因表达盒和目的基因表达盒插入的酶切位点，方便不同基因的表达和突变研究，如蛋白酶在该系统的表达和突变研究。本发明构建的基于载体骨架pUC‑ASPG和东方肉座菌胞外蛋白低背景工程菌株的定位表达系统，通过敲除xyr1基因后，菌株△xyr1‑3在诱导条件下基本不表达纤维素酶和半纤维素酶，消除了纤维素酶和半纤维素酶的本底表达，使东方肉座菌△xyr1‑3适合于纤维素酶、半纤维素酶及其它真菌分泌蛋白的表达和突变研究。