一种DNA克隆方法
    4.
    发明公开

    公开(公告)号:CN102321660A

    公开(公告)日:2012-01-18

    申请号:CN201110304950.X

    申请日:2011-09-28

    Applicant: 厦门大学

    Abstract: 一种DNA克隆方法,涉及一种DNA克隆方法。在载体插入位点处用限制性内切酶消化载体获线形载体DNA;根据目的DNA片段和载体插入位点处序列设计合成PCR扩增引物,再PCR扩增,获目的DNA片段;纯化线形载体DNA和目的DNA片段,再混合,并加入核酸外切酶III和核酸外切酶III反应缓冲液组成反应体系,继续反应,加入乙二胺四乙酸二钠以终止反应,再反应后,退火;从反应体系中取转化大肠杆菌E.coli感受态细胞;将转化菌液涂布含相应抗生素的LB培养基平板培养;从培养平板中挑取单克隆菌落,提取质粒进行鉴定,以确定目的DNA片段的成功克隆。不依赖限制性酶切位点和连接酶,能实现DNA片段快速高效克隆。

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