公开(公告)号：CN102676464A

公开(公告)日：2012-09-19

申请号：CN201210156846.5

申请日：2012-05-18

Applicant: 南开大学

Inventor： 马克·巴特兰姆 ,  王莹莹 ,  纪玉蕊 ,  郝振宇 ,  毛冠男

IPC: C12N9/02 ,  C12N15/70 ,  G01N23/20 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明涉及一株嗜热脱氮芽孢杆菌的正烷烃末端降解途径中的嗜热长链烷醛醛脱氢酶及其晶体结构。本发明利用分子克隆方法将目的基因克隆到大肠杆菌E.coli中进行异源表达。通过蛋白质纯化方法获得醛脱氢酶的纯品。利用悬滴结晶法得到适宜衍射的醛脱氢酶的结晶。利用X射线衍射方法对醛脱氢酶的晶体结构进行解析。结果表明，该醛脱氢酶中含有一个特征性的ALDH折叠，由三个结构域构成。对酶活性部位的保守残基进行定点突变，通过该酶的野生型及其突变体的酶活性实验证明保守残基对酶活性的影响。这些结果能全方位反应该酶的空间构象，为进一步研究醛脱氢酶的结构与功能之间的关系、提高酶的降解活性提供理论上的指导。

公开(公告)号：CN102676464B

公开(公告)日：2014-03-05

申请号：CN201210156846.5

申请日：2012-05-18

Applicant: 南开大学

Inventor： 马克·巴特兰姆 ,  王莹莹 ,  纪玉蕊 ,  郝振宇 ,  毛冠男

IPC: C12N9/02 ,  C12N15/70 ,  G01N23/20 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明涉及一株嗜热脱氮芽孢杆菌的正烷烃末端降解途径中的嗜热长链烷醛醛脱氢酶及其晶体结构。本发明利用分子克隆方法将目的基因克隆到大肠杆菌E.coli中进行异源表达。通过蛋白质纯化方法获得醛脱氢酶的纯品。利用悬滴结晶法得到适宜衍射的醛脱氢酶的结晶。利用X射线衍射方法对醛脱氢酶的晶体结构进行解析。结果表明，该醛脱氢酶中含有一个特征性的ALDH折叠，由三个结构域构成。对酶活性部位的保守残基进行定点突变，通过该酶的野生型及其突变体的酶活性实验证明保守残基对酶活性的影响。这些结果能全方位反应该酶的空间构象，为进一步研究醛脱氢酶的结构与功能之间的关系、提高酶的降解活性提供理论上的指导。