公开(公告)号：CN1100149C

公开(公告)日：2003-01-29

申请号：CN99123085.X

申请日：1999-12-10

Applicant: 南开大学 ,  天津市蔬菜研究所

Inventor： 杜荣骞 ,  叶明 ,  李德森 ,  居玉玲 ,  李戌彤 ,  古瑜 ,  罗智敏 ,  魏众济

IPC: C12Q1/25 ,  C12Q1/68

Abstract: 本发明属马铃薯纺锤块茎类病毒的检测方法，本发明是利用Taq酶在PCR扩增体系内将类病毒RNA反转录为cDNA，同时完成cDNA扩增，用琼脂糖电泳检测扩增产物，判断病毒的有无。本发明检测速度快，可同时检测数十个样品；灵敏度高，可检测到纳克级的病毒RNA；特异性强，由于引物的特异性，只能特异性地扩增病毒cDNA；廉价，Taq的价格远远低于反转录酶。

公开(公告)号：CN101423868A

公开(公告)日：2009-05-06

申请号：CN200810154013.9

申请日：2008-12-12

Applicant: 南开大学

Inventor： 宋文芹 ,  王春国 ,  郝擘 ,  陈成彬 ,  古瑜 ,  孙德岭

IPC: C12Q1/68

Abstract: 本发明公开了一个对花椰菜抗黑腐病新品种进行早期筛查的试剂盒和使用该试剂盒的检测方法。试剂盒由dNTP、Taq聚合酶、PCR缓冲液、DNA模板、无菌去离子水、6×上样缓冲液及标准阳性Marker组成。检测方法包括以下步骤：(1)花椰菜基因组DNA的一步法提取；(2)基因组DNA提取结果的琼脂糖凝胶电泳检测；(3)PCR扩增；(4)PCR扩增产物凝胶电泳检测；(5)结果判读：依照标准阳性Marker带在凝胶上的迁移位置和PCR产物的迁移位置判断未知花椰菜抗、感黑腐病情况。利用该试剂盒筛查鉴定抗黑腐病花椰菜新品种或株系的结果与田间抗病性状吻和率达96％以上。该试剂盒检测具有简便、快速、准确，不受生长季节、环境条件等因素的影响，且可在苗期就能完成筛查、鉴定，节省了大量土地、人力、物力，并大大缩短了选种时间，在花椰菜抗黑腐病育种上具有重要的应用价值。

公开(公告)号：CN101475979A

公开(公告)日：2009-07-08

申请号：CN200810154014.3

申请日：2008-12-12

Applicant: 南开大学

Inventor： 王春国 ,  郝擘 ,  陈成彬 ,  宋文芹 ,  古瑜 ,  孙德岭

IPC: C12Q1/68 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一对用于花椰菜抗黑腐病鉴定的特异引物和鉴定方法，引物序列由：5’ACCTAAAGGAGGCAAAGTCAAGC3’和5’AATGGCAAGGGTTCAAGGGTAGG3’组成。使用上述引物鉴定花椰菜抗黑腐病的方法包括4个步骤：(1)花椰菜基因组DNA的提取及检测；(2)特异引物对的PCR扩增；(3)PCR产物的凝胶电泳检测；(4)结果判读：依据被检测花椰菜基因组DNA的PCR扩增结果鉴定被检花椰菜是否抗黑腐病。采用上述方法鉴定的结果与田间吻合率达95％以上。该方法在花椰菜抗黑腐病的筛选上具有重要的应用价值。

公开(公告)号：CN1256318A

公开(公告)日：2000-06-14

申请号：CN99123085.X

申请日：1999-12-10

Applicant: 南开大学 ,  天津市蔬菜研究所

Inventor： 杜荣骞 ,  叶明 ,  李德森 ,  居玉玲 ,  李戌彤 ,  古瑜 ,  罗智敏 ,  魏众济

IPC: C12Q1/25 ,  C12Q1/68

Abstract: 本发明属马铃薯纺锤块茎类病毒的检测方法,本发明是利用Taq酶在PCR扩增体系内将类病毒RNA反转录为cDNA,同时完成cDNA扩增,用琼脂糖电泳检测扩增产物,判断病毒的有无。本发明检测速度快,可同时检测数十个样品;灵敏度高,可检测到纳克级的病毒RNA;特异性强,由于引物的特异性,只能特异性地扩增病毒cDNA;廉价,Taq的价格远远低于反转录酶。