公开(公告)号：CN117230135A

公开(公告)日：2023-12-15

申请号：CN202310832160.1

申请日：2023-07-07

Applicant: 南京工业大学

Inventor： 任路静 ,  杜晨晨 ,  江凌 ,  党梦晗 ,  胡学超

IPC: C12P19/30 ,  C12N11/02

Abstract: 本发明公开一种双酶偶联结合DNA支架提高NMN合成效率的方法，包括：将克鲁维氏酵母来源烟酰胺核糖激酶KLUNRK和大肠杆菌来源的ATP循环酶PPK分别导入载体质粒，获得KLUNRK重组质粒和PPK重组质粒；在KLUNRK的C端通过第一Linker连接第一锌指蛋白，在PPK的N端通过第二Linker连接第二锌指蛋白，分别构建KLUNRK和PPK的融合蛋白重组质粒；将KLUNRK融合蛋白重组质粒和PPK融合蛋白重组质粒分别纯化表达，获得KLUNRK融合蛋白和PPK融合蛋白；将两种融合蛋白与DNA支架混合后加入NMN合成的反应体系，进行NMN合成，反应体系中还包括底物NR和ATP。本发明利用温和且易实现的DNA支架技术，在双酶偶联的基础上，有效提高了NMN合成效率，降低生产成本，具有巨大的工业化生产潜力。

公开(公告)号：CN118127101A

公开(公告)日：2024-06-04

申请号：CN202410298474.2

申请日：2024-03-15

Applicant: 南京工业大学

Inventor： 任路静 ,  党梦晗 ,  杜晨晨 ,  胡学超

IPC: C12P19/30 ,  C12N15/54 ,  C12N15/70

Abstract: 本发明公开一种β‑烟酰胺单核苷酸合成方法，包括：以大肠杆菌为宿主菌建立表达烟酰胺核糖激酶的基因工程菌；诱导表达所述基因工程菌并纯化，获得纯酶液；以烟酰胺核糖为底物，ATP为磷酸供体，并添加所述纯酶液构建β‑烟酰胺单核苷酸的合成体系，合成β‑烟酰胺单核苷酸；所述烟酰胺核糖激酶来源于绣球菌，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明的方法在较宽的温度范围下均有良好的合成效果，且使用的酶在弱碱性条件下相比现有NRK酶酶活高，本发明的方法在10min内可将底物烟酰胺核糖氯化物的转化率提高至80%以上，还可进一步联合PPK酶进行共催化，降低了ATP的供应，适合于产业应用。