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公开(公告)号：CN106480039B
公开(公告)日：2019-11-12
申请号：CN201610894672.0
申请日：2016-10-13
Applicant: 南京大学
IPC: C12N15/115 , G01N33/68
Abstract: 本发明公开了一种新型微阵列微流控芯片应用于适配体筛选的方法。该筛选芯片综合应用微阵列和微流控技术，将正负筛过程集合在一块微流控芯片上，筛选7轮后即获得高亲和力的适配体。同时本发明还公开了乳铁蛋白适配体筛选的具体步骤，包括芯片制备、正负筛过程、PCR扩增等详细过程。该方法筛选出的适配体对靶标蛋白的特异性好，亲和性高；且该适配体较抗体更容易获得，可以大量、快速的体外合成；制备方法更为简单快捷，因此该适配体在许多领域将有望成为抗体技术有益的补充。此外，该正负筛集合的芯片模式方便、快捷、高效，可以用于其它蛋白的适配体筛选，为其他适配体筛选工作者提供了很好的思路设计和参考。
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公开(公告)号：CN106770138B
公开(公告)日：2019-08-06
申请号：CN201710068601.X
申请日：2017-02-08
Applicant: 南京大学
IPC: G01N21/64
Abstract: 本发明公开了基于双信号放大的荧光偏振适配体传感器，包括信号产生探针和捕获探针，所述信号产生探针和捕获探针的核苷酸序列如SEQ ID ON.1～15所示，该传感器用于均相溶液中乳铁蛋白的高灵敏性检测。本发明在不改变适配体高亲和力和特异性的前提下优化了适配体的结构。在该方法中，两段截断适配体分别修饰异硫氰酸荧光素(FITC)和银纳米粒子(Ag10NPs)，加入乳铁蛋白后三者组装成截断适配体‑乳铁蛋白的复合物，缩短了Ag10NPs和FITC的空间距离。因此，Ag10NPs可以产生重量扩增效应和荧光表面增强效应，最终引起荧光偏振信号急剧增加。结果表明该传感器相对于传统的均相溶液检测限可以降低三个数量级，达到1.25pM。
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公开(公告)号：CN106867882A
公开(公告)日：2017-06-20
申请号：CN201710071570.3
申请日：2017-02-09
Applicant: 南京大学
CPC classification number: B01L3/502769 , B01L3/50851 , B01L2200/027 , B01L2300/18
Abstract: 本发明公开一种适配体筛选用多腔室微流控PCR芯片，该多腔室微流控PCR芯片包括微流PCR反应片、温度循环加热板、玻璃基底、芯片夹具，所述PDMS反应片上反应液注入孔、Z型混合单元、流入微流通道、PCR扩增室、流出微流通道、反应液流出孔依次联通。该微流控PCR芯片采用多个反应腔室，可保证次级文库的高质、足量获取及核酸种类多样性；该微流控PCR芯片通过荧光实时扩增曲线可以快速获取最优扩增条件，将适配体筛选的核酸序列进行最优条件下扩增。本发明还公开了利用多腔室微流控PCR芯片适筛选配体的方法，该方法可以用于各类靶标适配体筛选的PCR扩增，为其他适配体筛选工作者提供了很好的思路设计和参考。
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公开(公告)号：CN106770138A
公开(公告)日：2017-05-31
申请号：CN201710068601.X
申请日：2017-02-08
Applicant: 南京大学
IPC: G01N21/64
CPC classification number: G01N21/6486
Abstract: 本发明公开了基于双信号放大的荧光偏振适配体传感器，包括信号产生探针和捕获探针，所述信号产生探针和捕获探针的核苷酸序列如SEQ ID ON.1～15所示，该传感器用于均相溶液中乳铁蛋白的高灵敏性检测。本发明在不改变适配体高亲和力和特异性的前提下优化了适配体的结构。在该方法中，两段截断适配体分别修饰异硫氰酸荧光素(FITC)和银纳米粒子(Ag10NPs)，加入乳铁蛋白后三者组装成截断适配体‑乳铁蛋白的复合物，缩短了Ag10NPs和FITC的空间距离。因此，Ag10NPs可以产生重量扩增效应和荧光表面增强效应，最终引起荧光偏振信号急剧增加。结果表明该传感器相对于传统的均相溶液检测限可以降低三个数量级，达到1.25pM。
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公开(公告)号：CN106867882B
公开(公告)日：2021-04-06
申请号：CN201710071570.3
申请日：2017-02-09
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明公开一种适配体筛选用多腔室微流控PCR芯片，该多腔室微流控PCR芯片包括微流PCR反应片、温度循环加热板、玻璃基底、芯片夹具，所述PDMS反应片上反应液注入孔、Z型混合单元、流入微流通道、PCR扩增室、流出微流通道、反应液流出孔依次联通。该微流控PCR芯片采用多个反应腔室，可保证次级文库的高质、足量获取及核酸种类多样性；该微流控PCR芯片通过荧光实时扩增曲线可以快速获取最优扩增条件，将适配体筛选的核酸序列进行最优条件下扩增。本发明还公开了利用多腔室微流控PCR芯片适筛选配体的方法，该方法可以用于各类靶标适配体筛选的PCR扩增，为其他适配体筛选工作者提供了很好的思路设计和参考。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN105929017B
公开(公告)日：2018-04-27
申请号：CN201610415587.1
申请日：2016-06-14
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明公开了二硫化钼/纳米银复合物作为基质在基质辅助激光解吸电离(MALDI)飞行时间质谱检测中的应用。首先通过改进的化学锂离子插层剥离法制备得到寡片层的二硫化钼，并在此基础上通过原位还原硝酸银制备得到二硫化钼/纳米银复合物。以该复合物作为MALDI基质的分析方法适用于对分子量小于1000的小分子进行质谱分析。适合的分子种类包括氨基酸、寡肽、脂肪酸、生物碱、激素、抗生素、抗菌药和抗癌药物等。采用本方法检测质荷比值(m/z)小于1000的分子时，不存在基质背景干扰现象。本方法可在有机与生物质谱、质谱成像、蛋白质谱学、代谢组学、生物标记物发现和环境分析等领域得到有效的应用。
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公开(公告)号：CN106645050A
公开(公告)日：2017-05-10
申请号：CN201610894671.6
申请日：2016-10-13
Applicant: 南京大学
IPC: G01N21/64
CPC classification number: G01N21/6445
Abstract: 本发明公开了一种用于检测乳铁蛋白含量的适配体，所述适配体的核苷酸序列如SEQ ID NO.5～65所示。本发明还公开了利用上述适配体检测乳铁蛋白的方法，该方法以荧光标记的适配体作为探针分子，通过适配体与乳铁蛋白的特异性结合使荧光偏振信号发生变化。荧光偏振信号与乳铁蛋白浓度之间存在线性关系从而实现对乳铁蛋白的定量检测。此方法灵敏度高，特异性好，检测的线性范围为0.78～50μg/mL。该方法能实现对复杂样品中目标物的测量，如牛奶中乳铁蛋白的测量。此外，该方法使用BioTeK酶标仪对96孔板直接扫描，达到了快速、高通量测量的要求，可以同时对多个样品进行有效测量。
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公开(公告)号：CN106645050B
公开(公告)日：2019-07-26
申请号：CN201610894671.6
申请日：2016-10-13
Applicant: 南京大学
IPC: G01N21/64
Abstract: 本发明公开了一种用于检测乳铁蛋白含量的适配体，所述适配体的核苷酸序列如SEQ ID NO.5～65所示。本发明还公开了利用上述适配体检测乳铁蛋白的方法，该方法以荧光标记的适配体作为探针分子，通过适配体与乳铁蛋白的特异性结合使荧光偏振信号发生变化。荧光偏振信号与乳铁蛋白浓度之间存在线性关系从而实现对乳铁蛋白的定量检测。此方法灵敏度高，特异性好，检测的线性范围为0.78～50μg/mL。该方法能实现对复杂样品中目标物的测量，如牛奶中乳铁蛋白的测量。此外，该方法使用BioTeK酶标仪对96孔板直接扫描，达到了快速、高通量测量的要求，可以同时对多个样品进行有效测量。
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公开(公告)号：CN106480039A
公开(公告)日：2017-03-08
申请号：CN201610894672.0
申请日：2016-10-13
Applicant: 南京大学
IPC: C12N15/115 , G01N33/68
Abstract: 本发明公开了一种新型微阵列微流控芯片应用于适配体筛选的方法。该筛选芯片综合应用微阵列和微流控技术，将正负筛过程集合在一块微流控芯片上，筛选7轮后即获得高亲和力的适配体。同时本发明还公开了乳铁蛋白适配体筛选的具体步骤，包括芯片制备、正负筛过程、PCR扩增等详细过程。该方法筛选出的适配体对靶标蛋白的特异性好，亲和性高；且该适配体较抗体更容易获得，可以大量、快速的体外合成；制备方法更为简单快捷，因此该适配体在许多领域将有望成为抗体技术有益的补充。此外，该正负筛集合的芯片模式方便、快捷、高效，可以用于其它蛋白的适配体筛选，为其他适配体筛选工作者提供了很好的思路设计和参考。
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公开(公告)号：CN105929017A
公开(公告)日：2016-09-07
申请号：CN201610415587.1
申请日：2016-06-14
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明公开了二硫化钼/纳米银复合物作为基质在基质辅助激光解吸电离(MALDI)飞行时间质谱检测中的应用。首先通过改进的化学锂离子插层剥离法制备得到寡片层的二硫化钼，并在此基础上通过原位还原硝酸银制备得到二硫化钼/纳米银复合物。以该复合物作为MALDI基质的分析方法适用于对分子量小于1000的小分子进行质谱分析。适合的分子种类包括氨基酸、寡肽、脂肪酸、生物碱、激素、抗生素、抗菌药和抗癌药物等。采用本方法检测质荷比值(m/z)小于1000的分子时，不存在基质背景干扰现象。本方法可在有机与生物质谱、质谱成像、蛋白质谱学、代谢组学、生物标记物发现和环境分析等领域得到有效的应用。
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