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公开(公告)号:CN113684225B
公开(公告)日:2023-09-08
申请号:CN202110592538.6
申请日:2021-05-28
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种番茄SlHMGA3基因在培育果实延迟成熟的番茄中的应用,属于番茄基因工程技术领域,该应用方法先构建出番茄SlHMGA3基因CRISPR/Cas9表达载体;设计SlHMGA3基因的2个靶序列,然后将启动子连同包含2个靶点的sgRNA序列进行基因合成后,插入到载体的两个酶切位点之间,得到SlHMGA3基因突变载体。构建的测序正确载体转入宿主细胞中,再利用其侵染番茄的子叶外植体,在阳性转基因番茄后代中筛选SlHMGA3基因突变但不包含基因敲除载体序列的番茄植株,获得果实延迟成熟的番茄植株。为了便于对番茄植株进行鉴定及筛选,可对所使用的载体进行加工,如加入植物可选择性标记或具有抗性的抗生素标记物等。
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公开(公告)号:CN114807198B
公开(公告)日:2024-03-22
申请号:CN202210606954.1
申请日:2022-05-31
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明提供了一种带有可视化蛋白融合抗生素筛选标记的CRISPR/Cas9载体及其构建方法和应用,属于基因工程技术领域。通过将抗生素筛选标记和可视化蛋白进行融合,由同一个启动子驱动,成功构建了一种载体大小更小、转化率更高的新的带有可视化蛋白标记的CRISPR/Cas9载体,并成功将该CRISPR/Cas9载体用于构建了番茄SlD14基因的基因编辑载体,最终培育出表型与野生番茄表型明显不同的转基因番茄植株,证明了该CRISPR/Cas9载体的有效性。
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公开(公告)号:CN114807198A
公开(公告)日:2022-07-29
申请号:CN202210606954.1
申请日:2022-05-31
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明提供了一种带有可视化蛋白融合抗生素筛选标记的CRISPR/Cas9载体及其构建方法和应用,属于基因工程技术领域。通过将抗生素筛选标记和可视化蛋白进行融合,由同一个启动子驱动,成功构建了一种载体大小更小、转化率更高的新的带有可视化蛋白标记的CRISPR/Cas9载体,并成功将该CRISPR/Cas9载体用于构建了番茄SlD14基因的基因编辑载体,最终培育出表型与野生番茄表型明显不同的转基因番茄植株,证明了该CRISPR/Cas9载体的有效性。
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公开(公告)号:CN113684225A
公开(公告)日:2021-11-23
申请号:CN202110592538.6
申请日:2021-05-28
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种番茄SlHMGA3基因在培育果实延迟成熟的番茄中的应用,属于番茄基因工程技术领域,该应用方法先构建出番茄SlHMGA3基因CRISPR/Cas9表达载体;设计SlHMGA3基因的2个靶序列,然后将启动子连同包含2个靶点的sgRNA序列进行基因合成后,插入到载体的两个酶切位点之间,得到SlHMGA3基因突变载体。构建的测序正确载体转入宿主细胞中,再利用其侵染番茄的子叶外植体,在阳性转基因番茄后代中筛选SlHMGA3基因突变但不包含基因敲除载体序列的番茄植株,获得果实延迟成熟的番茄植株。为了便于对番茄植株进行鉴定及筛选,可对所使用的载体进行加工,如加入植物可选择性标记或具有抗性的抗生素标记物等。
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