公开(公告)号：CN104651392A

公开(公告)日：2015-05-27

申请号：CN201510009526.0

申请日：2015-01-06

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 庄楚雄 ,  周海 ,  黄志丰 ,  姜大刚 ,  李静

IPC: C12N15/82 ,  C12N15/11 ,  A01H5/00

Abstract: 本发明公开了一种利用CRISPR/Cas9系统定点突变PTMS12-1获得温敏不育系的方法，包括克隆控制培矮64S温敏不育的主效基因P/TMS12-1片段；根据P/TMS12-1序列设计靶标序列；构建含靶标序列片段的pU3-gRNA载体；构建pCRISPR/Cas9载体；利用上述含靶标序列片段的pCRISPR/Cas9载体获得阳性转基因苗；从阳性转基因苗中筛选突变植株；将突变植株传代种植获得不带转基因成分的温敏不育株系。本发明利用CRISPR/Cas9系统，彻底失活P/TMS12-1非编码RNA的活性，人工培育获得不带转基因成分的温敏不育系，具有目的性强，基因组损伤小等优点，避免转基因的影响。

公开(公告)号：CN104651392B

公开(公告)日：2018-07-31

申请号：CN201510009526.0

申请日：2015-01-06

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 庄楚雄 ,  周海 ,  黄志丰 ,  姜大刚 ,  李静

IPC: C12N15/82 ,  C12N15/11 ,  A01H5/00 ,  A01H6/46

Abstract: 本发明公开了种利用CRISPR/Cas9系统定点突变PTMS12‑1获得温敏不育系的方法,包括克隆控制培矮64S温敏不育的主效基因P/TMS12‑1片段;根据P/TMS12‑1序列设计靶标序列;构建含靶标序列片段的pU3‑gRNA载体;构建pCRISPR/Cas9载体;利用上述含靶标序列片段的pCRISPR/Cas9载体获得阳性转基因苗;从阳性转基因苗中筛选突变植株;将突变植株传代种植获得不带转基因成分的温敏不育株系。本发明利用CRISPR/Cas9系统,彻底失活P/TMS12‑1非编码RNA的活性,人工培育获得不带转基因成分的温敏不育系,具有目的性强,基因组损伤小等优点,避免转基因的影响。