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公开(公告)号：CN119307654A
公开(公告)日：2025-01-14
申请号：CN202310852788.8
申请日：2023-07-12
Applicant: 北京工商大学
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6816 , C12N15/113 , C12N15/11 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了基于通用型荧光纳米颗粒计数法结合CRISPR/Cas12a识别用于HPV病毒核酸检测的试剂盒，属于核酸检测领域，包括：crRNA、Cas12a、缓冲液3.1、RNA酶抑制剂、Target、HPV‑MB、HPV‑FNP，本发明利用Cas12a核酸分子识别特性、荧光纳米颗粒特性、碱基互补配对杂交以及磁分离原理，首次将荧光纳米颗粒计数与CRISPR检测相结合，实现通用型病毒核酸检测，操作简便，观察容易，拓宽了CRISPR/Cas探针设计方法。以HPV16、18病毒核酸为例，进行核酸检测示意，最低能够检测到1pM。并选取HPV16病毒和HPV18假病毒为例做实际样品检测验证。
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公开(公告)号：CN119144704A
公开(公告)日：2024-12-17
申请号：CN202310711635.1
申请日：2023-06-15
Applicant: 北京工商大学
IPC: C12Q1/6844 , C12Q1/70 , C12Q1/6886 , C12N15/113 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了基于CRISPR/Cas12a结合万能crRNA进行多种核酸检测的试剂盒，属于核酸检测领域，包括：crRNA、Cas12a、缓冲液3.1、缓冲液2、RNA酶抑制剂、BstDNA聚合酶、dNTP混合液，本发明利用Cas12a反式切割活性，首次将单一类型的crRNA应用于不同类型病毒的核酸检测中，使用相同的crRNA，可以检测多种病毒核酸，包括但不限于SARS‑CoV‑2、HPV病毒的多种亚型以及肿瘤标志物miRNA等，拓宽了CRISPR/Cas核酸检测的设计思路和方法，并具有良好的分析性能，在优化的实验条件下，使用同一种crRNA，可以有效检测多种DNA病毒和RNA病毒，并且具有较高灵敏度，可以检测到浓度为5pM。以HPV‑16假病毒为例，进行实际样品检测。
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公开(公告)号：CN117004762A
公开(公告)日：2023-11-07
申请号：CN202210453464.2
申请日：2022-04-27
Applicant: 北京工商大学
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6816 , C12N15/11 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了荧光分子信标作为Cas12信号探针的新型冠状病毒检测试剂盒及检测方法，属于核酸检测领域。检测试剂盒包括：0.5μL 20μM crRNA(500nM)、0.5μL 10μM Cas12a蛋白(250nM)、1μL 10μM荧光分子信标(500nM)，后简称reporter、15μL缓冲液3.1和1μL RNA酶抑制剂。本发明首次利用分子信标探针解决了传统CRISPR/Cas信号读出方式中CRISPR荧光探针普遍存在灵敏度低、背景信号高的问题，拓宽了CRISPR/Cas探针设计方法，用于新冠病毒核酸检测中，具有良好的分析性能。在优化的实验条件下，使用单crRNA，对于ORF1a靶标的检测限为1pM,使用双crRNA检测限为100fM，灵敏度提高了10倍。在实际样品检测时，选取和新冠病毒序列相似性极高(85.8％)但传染性极低的GX/P2V，最低能够检测到27copies/mL。
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公开(公告)号：CN117004763A
公开(公告)日：2023-11-07
申请号：CN202210453473.1
申请日：2022-04-27
Applicant: 北京工商大学
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6816
Abstract: 本发明公开了基于Cas12a和金纳米链置换探针新冠病毒核酸裸眼检测的试剂和方法，属于核酸检测领域，利用Cas12a反式切割活性和金纳米颗粒链置换反应原理，包括：crRNA、Cas12a、缓冲液3.1、RNA酶抑制剂和金纳米链置换探针，本发明首次将金纳米链置换探针与CRISPR检测相结合，在同一个离心管中即可完成反应，实现裸眼检测，利用家庭用暖宝宝温育即可，操作简便，观察容易，适用于POCT产品开发，拓宽了CRISPR/Cas探针设计方法，以新冠病毒核酸ORF1a为例，最低能够检测到100pM，最低检测时间为20min。选取和新冠病毒序列相似性极高(85.8％)但传染性极低的GX/P2V为例做实际样品检测，最低能够检测到27copies/mL。
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