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公开(公告)号：CN115747219A
公开(公告)日：2023-03-07
申请号：CN202211349884.2
申请日：2022-10-31
Applicant: 北京大学第三医院(北京大学第三临床医学院)
IPC: C12N15/113 , A01K67/027 , C12N9/22 , C12N15/85
Abstract: 本发明涉及一种用于敲除SPARC基因的CRISPR/Cas9系统、sgRNA的筛选方法及应用。该用于敲除SPARC基因的sgRNA的筛选方法包括如下步骤：提供一个或多个含有T7启动子的T7‑sgRNA骨架，所述T7‑sgRNA骨架包括酶切位点序列、T7启动子序列和sgRNA序列；以所述T7‑sgRNA骨架为模板，对其进行PCR扩增及体外转录，得到包含PCR产物和sgRNA的复合体；以及通过Cas9蛋白对所述包含PCR产物和sgRNA的复合体进行体外酶切，以酶切效率对sgRNA进行筛选。本发明一实施方式的筛选方法，可同时高效的对多个sgRNA进行筛选，能够显著降低筛选成本，可缩短基因敲除小鼠的制备时间，并高效的获得SPARC基因敲除小鼠。
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