公开(公告)号：CN1891832A

公开(公告)日：2007-01-10

申请号：CN200510080550.X

申请日：2005-07-04

Applicant: 北京大学

Inventor： 安成才 ,  谭桂红 ,  高音 ,  石苗 ,  张欣跃 ,  何善平 ,  陈章良

IPC: C12P19/34

Abstract: 本发明公开了一种具有较高特异性，并且操作简单的PCR方法。该PCR方法，通过模板变性、SiteFinder在低温下与基因组模板退火、单方向延伸，将SiteFinder序列引入基因组序列之中；通过2轮PCR指数倍扩增目标DNA分子，而非目标分子因茎环结构的抑制作用而无法完成指数扩增，从而达到选择性扩增目标分子的目的；通过限制性内切酶识别位点选择性地克隆目标分子；最后，通过已知序列上GSP2下游的GSP3特异性的筛选目标分子。本发明的PCR方法与现有PCR方法相比，具有简单快速、特异性高、通用性强、重复性好、一次扩增片段较长且成本低廉等优点，广泛适用于分子生物学研究中多种目的染色体步查，如转基因动、植物及微生物中外源基因插入位点的鉴定、基因未知区段新基因的分离等。

公开(公告)号：CN102399812B

公开(公告)日：2013-04-10

申请号：CN201010276083.9

申请日：2010-09-07

Applicant: 北京大学

Inventor： 安成才 ,  黄萍 ,  张起涛 ,  付力文 ,  任娇 ,  宋莲芬 ,  杨扬 ,  孔双蕾 ,  高超 ,  何善平 ,  黄国维 ,  李艳东 ,  张磊 ,  于祥春 ,  张旭 ,  邬倩

IPC: C12N15/82 ,  A01H1/02 ,  A01G1/00 ,  A01C1/00 ,  C12N15/42

Abstract: 本发明公开了凤眼莲的遗传转化方法。该方法包括如下步骤：在授粉后的雨久花科植物雌蕊中的花粉管开始萌发之后和花粉管通道闭合之前，将含有外源基因的重组质粒的溶液或含有外源基因的重组菌的溶液滴加到授粉后的柱头上，使所述外源基因通过花粉管通道导入受精卵细胞，随着受精卵细胞的生长发育，得到转入所述外源基因的种子。实验证明，本发明方法的转化效率高，平均转化率可达1.44％，且得到的转化种子成苗率高。因此，本发明方法在凤眼莲(Eichhomia crassipes)的遗传改良领域将有广阔的应用前景。

公开(公告)号：CN101948869B

公开(公告)日：2012-08-29

申请号：CN201010273113.0

申请日：2010-09-06

Applicant: 北京大学

Inventor： 安成才 ,  黄萍 ,  杨扬 ,  任姣 ,  邬倩 ,  滑瑞 ,  何善平 ,  付力文 ,  张起涛 ,  于祥春

IPC: C12N15/82 ,  A01H5/00 ,  A01H5/10 ,  C12Q1/68 ,  G01N33/53

Abstract: 本发明公开了一种高通量大豆转基因方法。该方法，包括如下步骤：在大豆花的柱头上滴加基因转化液，成熟后收获种子。本方法避免了因剪切柱头带来的组织损伤，对T1代种子的结实率及发芽率的影响小。本发明提供的方法还包括筛选，该筛选包括如下步骤：在所述种子出苗后从真叶完全展开至第1三出叶展开之前，在叶面上喷洒除草剂；进一步筛选可以包括分子生物学检测，上述筛选方法操作流程简单、时间短、成本低，可用于实施高通量的筛选，而且筛选抗性苗的阳性率高，减少了分子检测的工作量。

公开(公告)号：CN101948869A

公开(公告)日：2011-01-19

申请号：CN201010273113.0

申请日：2010-09-06

Applicant: 北京大学

Inventor： 安成才 ,  黄萍 ,  杨扬 ,  任姣 ,  邬倩 ,  滑瑞 ,  何善平 ,  付力文 ,  张起涛 ,  于祥春

IPC: C12N15/82 ,  A01H5/00 ,  A01H5/10 ,  C12Q1/68 ,  G01N33/53

Abstract: 本发明公开了一种高通量大豆转基因方法。该方法，包括如下步骤：在大豆花的柱头上滴加基因转化液，成熟后收获种子。本方法避免了因剪切柱头带来的组织损伤，对T1代种子的结实率及发芽率的影响小。本发明提供的方法还包括筛选，该筛选包括如下步骤：在所述种子出苗后从真叶完全展开至第1三出叶展开之前，在叶面上喷洒除草剂；进一步筛选可以包括分子生物学检测，上述筛选方法操作流程简单、时间短、成本低，可用于实施高通量的筛选，而且筛选抗性苗的阳性率高，减少了分子检测的工作量。

公开(公告)号：CN100513577C

公开(公告)日：2009-07-15

申请号：CN200510080550.X

申请日：2005-07-04

Applicant: 北京大学

Inventor： 安成才 ,  谭桂红 ,  高音 ,  石苗 ,  张欣跃 ,  何善平 ,  陈章良

IPC: C12P19/34

Abstract: 本发明公开了一种具有较高特异性，并且操作简单的PCR方法。该PCR方法，通过模板变性、SiteFinder在低温下与基因组模板退火、单方向延伸，将SiteFinder序列引入基因组序列之中；通过2轮PCR指数倍扩增目标DNA分子，而非目标分子因茎环结构的抑制作用而无法完成指数扩增，从而达到选择性扩增目标分子的目的；通过限制性内切酶识别位点选择性地克隆目标分子；最后，通过已知序列上GSP2下游的GSP3特异性的筛选目标分子。本发明的PCR方法与现有PCR方法相比，具有简单快速、特异性高、通用性强、重复性好、一次扩增片段较长且成本低廉等优点，广泛适用于分子生物学研究中多种目的染色体步查，如转基因动、植物及微生物中外源基因插入位点的鉴定、基因未知区段新基因的分离等。

公开(公告)号：CN102399812A

公开(公告)日：2012-04-04

申请号：CN201010276083.9

申请日：2010-09-07

Applicant: 北京大学

Inventor： 安成才 ,  黄萍 ,  张起涛 ,  付力文 ,  任娇 ,  宋莲芬 ,  杨扬 ,  孔双蕾 ,  高超 ,  何善平 ,  黄国维 ,  李艳东 ,  张磊 ,  于祥春 ,  张旭 ,  邬倩

IPC: C12N15/82 ,  A01H1/02 ,  A01G1/00 ,  A01C1/00 ,  C12N15/42

Abstract: 本发明公开了凤眼莲的遗传转化方法。该方法包括如下步骤：在授粉后的雨久花科植物雌蕊中的花粉管开始萌发之后和花粉管通道闭合之前，将含有外源基因的重组质粒的溶液或含有外源基因的重组菌的溶液滴加到授粉后的柱头上，使所述外源基因通过花粉管通道导入受精卵细胞，随着受精卵细胞的生长发育，得到转入所述外源基因的种子。实验证明，本发明方法的转化效率高，平均转化率可达1.44％，且得到的转化种子成苗率高。因此，本发明方法在凤眼莲(Eichhomia crassipes)的遗传改良领域将有广阔的应用前景。