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公开(公告)号：CN106916821B
公开(公告)日：2020-12-22
申请号：CN201710231805.0
申请日：2017-04-11
申请人： 中国科学院南海海洋研究所
IPC分类号： C12N15/115 , G01N33/569
摘要： 本发明公开了一种ssDNA核酸适配体及其应用，ssDNA核酸适配体包括SEQ ID NO:1～3中任意一条或几条序列。本发明ssDNA核酸适配体对神经坏死病毒感染的石斑鱼脑细胞具有高特异性、高亲和力，可以应用于石斑鱼神经坏死病毒的快速检测和治疗方案。
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公开(公告)号：CN104789570B
公开(公告)日：2018-07-06
申请号：CN201510126068.9
申请日：2015-03-20
申请人： 中国科学院南海海洋研究所
IPC分类号： C12N15/115 , C12N15/10 , C12Q1/70 , C12R1/93
摘要： 本发明公开一种用于检测石斑鱼虹彩病毒感染的DNA核酸适配体及其筛选方法和应用。在每轮筛选过程中，引入两次反筛的步骤，首先将前一轮的单链DNA文库与正常细胞结合，以去除与正常石斑鱼细胞结合的非特异ssDNA，然后将上清与被石斑鱼虹彩病毒感染的细胞进行结合筛选，从被石斑鱼虹彩病毒感染的细胞上分离得到的ssDNA，然后再和正常细胞结合，分离得到上清。PCR扩增文库制备出单链的DNA文库。重复以上的筛选流程，与第一轮筛选的正常细胞数目相比，将筛选过程中正常细胞的数目提高2‑6倍，与第一轮筛选的文库与细胞的结合时间相比，在随后的筛选过程中，文库与正常细胞结合时间从0.5h增加至1h，文库与病毒感染细胞结合时间从1h缩短至0.5h，以提高每轮的筛选效率。
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公开(公告)号：CN104789569A
公开(公告)日：2015-07-22
申请号：CN201510125806.8
申请日：2015-03-20
申请人： 中国科学院南海海洋研究所
IPC分类号： C12N15/115 , C12N15/10 , C12Q1/70 , C12R1/93
摘要： 本发明公开一种用于检测石斑鱼虹彩病毒感染的DNA核酸适配体及其筛选方法和应用。在每轮筛选过程中，引入两次反筛的步骤，首先将前一轮的单链DNA文库与正常细胞结合，以去除与正常石斑鱼细胞结合的非特异ssDNA，然后将上清与被石斑鱼虹彩病毒感染的细胞进行结合筛选，从被石斑鱼虹彩病毒感染的细胞上分离得到的ssDNA，然后再和正常细胞结合，分离得到上清。PCR扩增文库制备出单链的DNA文库。重复以上的筛选流程，与第一轮筛选的正常细胞数目相比，将筛选过程中正常细胞的数目提高2-6倍，与第一轮筛选的文库与细胞的结合时间相比，在随后的筛选过程中，文库与正常细胞结合时间从0.5h增加至1h，文库与病毒感染细胞结合时间从1h缩短至0.5h，以提高每轮的筛选效率。
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公开(公告)号：CN104789569B
公开(公告)日：2017-11-21
申请号：CN201510125806.8
申请日：2015-03-20
申请人： 中国科学院南海海洋研究所
IPC分类号： C12N15/115 , C12N15/10 , C12Q1/70 , C12R1/93
摘要： 本发明公开一种用于检测石斑鱼虹彩病毒感染的DNA核酸适配体及其筛选方法和应用。在每轮筛选过程中，引入两次反筛的步骤，首先将前一轮的单链DNA文库与正常细胞结合，以去除与正常石斑鱼细胞结合的非特异ssDNA，然后将上清与被石斑鱼虹彩病毒感染的细胞进行结合筛选，从被石斑鱼虹彩病毒感染的细胞上分离得到的ssDNA，然后再和正常细胞结合，分离得到上清。PCR扩增文库制备出单链的DNA文库。重复以上的筛选流程，与第一轮筛选的正常细胞数目相比，将筛选过程中正常细胞的数目提高2‑6倍，与第一轮筛选的文库与细胞的结合时间相比，在随后的筛选过程中，文库与正常细胞结合时间从0.5h增加至1h，文库与病毒感染细胞结合时间从1h缩短至0.5h，以提高每轮的筛选效率。
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公开(公告)号：CN105785023A
公开(公告)日：2016-07-20
申请号：CN201610255794.5
申请日：2016-04-22
申请人： 中国科学院南海海洋研究所
IPC分类号： G01N33/58 , G01N33/569 , G01N33/543
CPC分类号： G01N33/581 , G01N33/543 , G01N33/56983
摘要： 本发明公开一种基于核酸适配体的Sandwich ELASA检测石斑鱼神经坏死病毒感染的方法。将生物素标记的核酸适配体固定到预先包被了链霉亲和素的孔板上，然后用固定的适配体去捕捉待测样品中的CP蛋白，再运用生物素标记的适配体去结合CP蛋白，再加入辣根过氧化物酶?链霉亲和素孵育结合，用辣根过氧化物酶显色试剂盒显色，根据吸光值变化分析是否有NNV病毒感染。本发明利用适配体的高亲和力、高特异性的特点，建立了基于适配体检测的夹心法ELASA检测方法，可用于石斑鱼养殖中神经坏死病毒的检测。与传统的ELISA及其他检测方法相比，本发明具有检测速度快，高灵敏度和特异性及低成本、易操作的特点。
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公开(公告)号：CN104789568B
公开(公告)日：2017-11-21
申请号：CN201510125778.X
申请日：2015-03-20
申请人： 中国科学院南海海洋研究所
IPC分类号： C12N15/115 , C12N15/10 , C12Q1/70 , C12R1/93
摘要： 本发明公开一种用于检测石斑鱼虹彩病毒感染的DNA核酸适配体及其筛选方法和应用。在每轮筛选过程中，引入两次反筛的步骤，首先将前一轮的单链DNA文库与正常细胞结合，以去除与正常石斑鱼细胞结合的非特异ssDNA，然后将上清与被石斑鱼虹彩病毒感染的细胞进行结合筛选，从被石斑鱼虹彩病毒感染的细胞上分离得到的ssDNA，然后再和正常细胞结合，分离得到上清。PCR扩增文库制备出单链的DNA文库。重复以上的筛选流程，与第一轮筛选的正常细胞数目相比，将筛选过程中正常细胞的数目提高2‑6倍，与第一轮筛选的文库与细胞的结合时间相比，在随后的筛选过程中，文库与正常细胞结合时间从0.5h增加至1h，文库与病毒感染细胞结合时间从1h缩短至0.5h，以提高每轮的筛选效率。
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公开(公告)号：CN104789696B
公开(公告)日：2017-07-11
申请号：CN201510125764.8
申请日：2015-03-20
申请人： 中国科学院南海海洋研究所
IPC分类号： C12Q1/70 , C12Q1/68 , C12N15/115 , C12R1/93
摘要： 本发明公开一种用于检测石斑鱼虹彩病毒感染的DNA核酸适配体及其筛选方法和应用。在每轮筛选过程中，引入两次反筛的步骤，首先将前一轮的单链DNA文库与正常细胞结合，以去除与正常石斑鱼细胞结合的非特异ssDNA，然后将上清与被石斑鱼虹彩病毒感染的细胞进行结合筛选，从被石斑鱼虹彩病毒感染的细胞上分离得到的ssDNA，然后再和正常细胞结合，分离得到上清。PCR扩增文库制备出单链的DNA文库。重复以上的筛选流程，与第一轮筛选的正常细胞数目相比，将筛选过程中正常细胞的数目提高2‑6倍，与第一轮筛选的文库与细胞的结合时间相比，在随后的筛选过程中，文库与正常细胞结合时间从0.5h增加至1h，文库与病毒感染细胞结合时间从1h缩短至0.5h，以提高每轮的筛选效率。
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公开(公告)号：CN105785024A
公开(公告)日：2016-07-20
申请号：CN201610259525.6
申请日：2016-04-22
申请人： 中国科学院南海海洋研究所
IPC分类号： G01N33/58 , G01N33/569 , G01N33/543
CPC分类号： G01N33/581 , G01N33/543 , G01N33/56983
摘要： 本发明公开一种基于核酸适配体的酶联免疫吸附技术检测石斑鱼虹彩病毒感染的方法。将生物素标记的核酸适配体与待测的细胞或组织孵育结合，然后将待测样品清洗后，加入辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素，孵育结束后清洗待测样品，加入辣根过氧化物酶显色试剂盒中TMB显色液进行显色反应，根据吸光值的变化判断待测细胞或组织样品是否受到石斑鱼虹彩病毒的感染。与现有的基于抗体的ELISA技术相比，本发明中基于核酸适配体的ELISA技术的优点在于：特异性强、灵敏度高、操作便捷、适用于在养殖场中养殖鱼类虹彩病毒感染的大批量快速检测，在虹彩病毒感染的检测领域有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN106916821A
公开(公告)日：2017-07-04
申请号：CN201710231805.0
申请日：2017-04-11
申请人： 中国科学院南海海洋研究所
IPC分类号： C12N15/115 , G01N33/569
摘要： 本发明公开了一种ssDNA核酸适配体及其应用，ssDNA核酸适配体包括SEQ ID NO:1～3中任意一条或几条序列。本发明ssDNA核酸适配体对神经坏死病毒感染的石斑鱼脑细胞具有高特异性、高亲和力，可以应用于石斑鱼神经坏死病毒的快速检测和治疗方案。
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公开(公告)号：CN104789696A
公开(公告)日：2015-07-22
申请号：CN201510125764.8
申请日：2015-03-20
申请人： 中国科学院南海海洋研究所
IPC分类号： C12Q1/70 , C12Q1/68 , C12N15/115 , C12R1/93
CPC分类号： G01N33/56983 , G01N2333/01
摘要： 本发明公开一种用于检测石斑鱼虹彩病毒感染的DNA核酸适配体及其筛选方法和应用。在每轮筛选过程中，引入两次反筛的步骤，首先将前一轮的单链DNA文库与正常细胞结合，以去除与正常石斑鱼细胞结合的非特异ssDNA，然后将上清与被石斑鱼虹彩病毒感染的细胞进行结合筛选，从被石斑鱼虹彩病毒感染的细胞上分离得到的ssDNA，然后再和正常细胞结合，分离得到上清。PCR扩增文库制备出单链的DNA文库。重复以上的筛选流程，与第一轮筛选的正常细胞数目相比，将筛选过程中正常细胞的数目提高2-6倍，与第一轮筛选的文库与细胞的结合时间相比，在随后的筛选过程中，文库与正常细胞结合时间从0.5h增加至1h，文库与病毒感染细胞结合时间从1h缩短至0.5h，以提高每轮的筛选效率。
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