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发明公开
一种gRNA体外合成及活性检测的方法审中-实审

公开(公告)号：CN104531675A

公开(公告)日：2015-04-22

申请号：CN201410758253.5

申请日：2014-12-10

Applicant: 中国医学科学院医学实验动物研究所

Inventor： 雍伟东 , 杜建勇 , 邓然

IPC: C12N15/10 , C12N15/11 , C12Q1/68

Abstract: 本发明公开了一种体外快速合成gRNA及检测方法的技术。本发明提供了一种体外合成目标基因的特异gRNA的方法，包括如下步骤：1)合成扩增gRNA转录模板的上游引物、扩增gRNA转录模板的下游引物和gRNA保守片段；2)以所述gRNA保守片段为模板，用所述扩增gRNA转录模板的上游引物和所述扩增gRNA转录模板的下游引物进行PCR反应，得到PCR产物为gRNA转录模板；3)将所述gRNA转录模板转录得到gRNA；即为目标基因的特异gRNA。本发明的实验证明，本发明通过一步PCR反应扩增，迅速得到足够浓度的带有T7promoter的gRNA的转录模板，并转录纯化得到有功能的gRNA。

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