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公开(公告)号：CN113373127B
公开(公告)日：2022-10-04
申请号：CN202110640339.8
申请日：2021-03-30
申请人： 中国农业科学院生物技术研究所
摘要： 本发明公开了Taq DNA聚合酶突变体及其应用。本发明提供了一种热稳定性提高的Taq DNA聚合酶单位点突变体，该突变体通过将SEQ ID No.1所示氨基酸序列进行G79E、G80A、D177E、A180V、E189P、S357A、A472E或G504K中的单位点突变所获得的突变体。在单位点突变的基础上，本发明提供了热稳定性进一步提高的Taq DNA聚合酶多位点突变体。qPCR热稳定性检测表明，本发明提供的Taq DNA聚合酶单位点或多位点突变体较野生型酶活有显著提高，热稳定性明显优于野生型Taq DNA聚合酶。本发明还提供了所述突变体作为Taq DNA聚合酶在基因扩增中的用途。
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公开(公告)号：CN113388591A
公开(公告)日：2021-09-14
申请号：CN202110945980.2
申请日：2021-08-18
申请人： 中国农业科学院生物技术研究所
摘要： 本发明公开了漆酶及其突变体和应用。本发明提供了从土壤中分离得到的氨基酸序列为SEQ ID No.1所示的野生型漆酶。为了提高野生型漆酶酶活，将其进行了单位点或多位点突变，其中，L508F、L507M、H436E、R431D、R355K、T294E、N196D、H439Y、L77I、G405V、D372K、K296E、V519T、T166K、A46G、R187E、W502F、R236K、N367D、M158A、V366A或V241I单位点突变所获得的突变体，其酶活力显著提高；在单位点突变的基础上，本发明进行了多位点组合突变，分别得到了酶活力显著提高的三位点、五位点以及七位点组合突变体。
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公开(公告)号：CN112725301B
公开(公告)日：2021-06-25
申请号：CN202110342666.5
申请日：2021-03-30
申请人： 中国农业科学院生物技术研究所
摘要： 本发明公开了Taq DNA聚合酶突变体及其应用。本发明提供了一种热稳定性提高的Taq DNA聚合酶单位点突变体，该突变体通过将SEQ ID No.1所示氨基酸序列进行G79E、G80A、D177E、A180V、E189P、S357A、A472E或G504K中的单位点突变所获得的突变体。在单位点突变的基础上，本发明提供了热稳定性进一步提高的Taq DNA聚合酶多位点突变体。qPCR热稳定性检测表明，本发明提供的Taq DNA聚合酶单位点或多位点突变体较野生型酶活有显著提高，热稳定性明显优于野生型Taq DNA聚合酶。本发明还提供了所述突变体作为Taq DNA聚合酶在基因扩增中的用途。
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公开(公告)号：CN112899257A
公开(公告)日：2021-06-04
申请号：CN202110225439.4
申请日：2020-12-07
申请人： 中国农业科学院生物技术研究所
摘要： 本发明公开了嗜热几丁质酶Chi304突变体及其在降解几丁质中的应用。本发明通过基因共识设计氨基酸序列为SEQ ID No.1所示的几丁质酶Chi304的系列单点突变体，最终成功筛选得到酶活和热稳定性提高的单点突变体Y166F以及表达量、最适温度、热稳定性和底物结合能力均提高的单点突变体D421E。此外，Y166F和D421E这两个单点突变体对底物的转化能力较野生型也有了明显的提高。本发明为工业上几丁质的高温酶法降解奠定了理论基础，并为几丁质酶的工业化应用创造了条件。
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公开(公告)号：CN112195168B
公开(公告)日：2021-03-19
申请号：CN202011414747.3
申请日：2020-12-07
申请人： 中国农业科学院生物技术研究所
摘要： 本发明公开了嗜热几丁质酶Chi304突变体及其制备方法和应用。本发明通过基因共识设计氨基酸序列为SEQ ID No.1所示的几丁质酶Chi304的系列单点突变体，最终成功筛选得到酶活和热稳定性提高的单点突变体Y166F以及表达量、最适温度、热稳定性和底物结合能力均提高的单点突变体D421E。此外，Y166F和D421E这两个单点突变体对底物的转化能力较野生型也有了明显的提高。本发明为工业上几丁质的高温酶法降解奠定了理论基础，并为几丁质酶的工业化应用创造了条件。
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公开(公告)号：CN112195168A
公开(公告)日：2021-01-08
申请号：CN202011414747.3
申请日：2020-12-07
申请人： 中国农业科学院生物技术研究所
摘要： 本发明公开了嗜热几丁质酶Chi304突变体及其制备方法和应用。本发明通过基因共识设计氨基酸序列为SEQ ID No.1所示的几丁质酶Chi304的系列单点突变体，最终成功筛选得到酶活和热稳定性提高的单点突变体Y166F以及表达量、最适温度、热稳定性和底物结合能力均提高的单点突变体D421E。此外，Y166F和D421E这两个单点突变体对底物的转化能力较野生型也有了明显的提高。本发明为工业上几丁质的高温酶法降解奠定了理论基础，并为几丁质酶的工业化应用创造了条件。
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公开(公告)号：CN108486110A
公开(公告)日：2018-09-04
申请号：CN201810229975.X
申请日：2015-03-31
申请人： 中国农业科学院生物技术研究所
IPC分类号： C12N15/113 , C12N15/75 , C12N15/63 , C12N1/21 , C12R1/125
摘要： 本发明公开了一种启动子，该启动子的长度为150-1000bp，其中，所述启动子具有如SEQ ID NO.1所示的核酸片段，并且所述启动子能够启动在枯草芽孢杆菌中的转录。本发明还提供了一种重组表达载体，该重组表达载体能够允许插入阅读框并使所插入的阅读框在细菌中表达出蛋白质，所述重组表达载体中的启动子包括如上所述的启动子。本发明还提供了如上所述的启动子在制备重组表达载体和/或表达质粒中的用途。通过上述技术方案，本发明在不进行诱导的条件下显著地提高了外源蛋白的表达量。
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公开(公告)号：CN104498499B
公开(公告)日：2018-08-28
申请号：CN201510038836.5
申请日：2015-01-26
申请人： 中国农业科学院生物技术研究所
IPC分类号： C12N15/113 , C12N15/82 , A01H5/00 , A01H6/46
摘要： 本发明公开了玉米组织特异性启动子及其应用，属于植物组织特异性启动子的分离和应用领域。本发明首先公开了从玉米中分离的核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示的组织特异性启动子，本发明将该组织特异性启动子序列进一步截短后获得仍具有启动子功能的SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3所示的截短的启动子片段。本发明进一步公开了所述组织特异性启动子或截短后的启动子片段在提高作物种子品质、改良作物性状以及培育转基因植物新品种等方面的应用。
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公开(公告)号：CN104651361B
公开(公告)日：2017-12-15
申请号：CN201410683469.X
申请日：2014-11-24
申请人： 中国农业科学院生物技术研究所
IPC分类号： C12N15/113 , C12N15/82 , A01H4/00 , A01H5/00
摘要： 本发明公开了玉米组织特异性启动子及其在提高作物种子品质中的应用，属于植物组织特异性启动子的分离和应用领域。本发明从玉米中分离获得核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示的组织特异性启动子，本发明进一步将SEQ ID NO.1的序列截短后获得SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.4所示的仍具有启动子功能的启动子缺失片段。本发明还公开了含有所述组织特异性启动子的重组植物表达载体以及重组宿主细胞。本发明进一步公开了所述组织特异性启动子或启动子缺失片段在提高作物种子品质、改良作物性状以及培育转基因植物新品种等方面的应用。
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公开(公告)号：CN106544331A
公开(公告)日：2017-03-29
申请号：CN201610950778.8
申请日：2016-10-26
申请人： 中国农业科学院生物技术研究所
摘要： 本发明公开了一种新的定向进化技术SNDS及所获得耐热高效甲基对硫磷水解杂合酶。本发明以两个亲本酶基因的互补单链DNA为出发序列分别进行酶切消化，消化后产物不经回收直接混合进行无引物PCR、构建突变体库并筛选有益突变体。本发明方法实现序列相似性较低的两个亲本基因的突变，有效扩展了DNA改组方法的应用；简化小片段回收步骤；实现100％重组并显著降低传统DNA shuffling所存在的重组偏好性，产生更好的基因多样性及重组类型，能够在很少的重组子中筛选到有益突变。采用本发明方法对序列相似性仅为50.9％的甲基对硫磷水解酶的OPHC2和MPH基因进行突变重排，筛选获得高效耐热的甲基对硫磷水解杂合酶。
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