公开(公告)号：CN115595327A

公开(公告)日：2023-01-13

申请号：CN202110721143.1

申请日：2021-06-28

Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)(CN)

Inventor： 高玉龙 ,  王笑梅 ,  祁小乐 ,  刘长军 ,  张艳萍 ,  潘青

IPC: C12N15/12 ,  C12N15/113 ,  C12N5/10 ,  C12N15/85 ,  C12N15/65 ,  C12N15/90 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明公开了一种抗ALV‑J的鸡chNHE1基因编辑细胞系及其构建方法。本发明利用CRISPR/Cas9方法和流式细胞术筛选，将ALV‑J细胞受体chNHE1基因的关键氨基酸位点V33进行突变以及W38进行缺失，同时为了便于后期基因编辑结果的鉴定，对其编码的第34‑37位氨基酸密码子进行同义替换。结果表明，含有W38位点缺失及V33位点突变的替换序列可高效定点替换chNHE1基因的相应序列，chNHE1基因编辑细胞系可在不影响细胞增殖水平的条件下抵抗ALV‑J的感染。本发明通过对chNHE1作为ALV‑J受体的关键氨基酸位点的突变，建立了高效的鸡chNHE1基因编辑细胞系的构建方法，为进一步研究chNHE1基因的功能奠定了基础。