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公开(公告)号：CN111455092B
公开(公告)日：2022-02-18
申请号：CN202010459753.4
申请日：2020-05-27
Applicant: 中国农业大学
IPC: C12Q1/6895 , C12Q1/6851 , C12N15/11 , C12N1/15 , C12R1/645
Abstract: 本发明公开了一种用于大丽轮枝菌定量PCR检测的内参菌株及其应用。本发明提供了一株用于对土壤中大丽轮枝菌qPCR定量检测结果进行校正的内参菌株，该内参菌株选用黑白轮枝菌菌株YJ3.3为出发菌株，在其基因组上插入多拷贝串联的人工构建内参DNA片段。本发明采用荧光定量PCR方法对土壤中大丽轮枝菌及定量加入的内参菌株进行检测，以内参菌株的回收效率对靶标大丽轮枝菌的回收效率进行校正。通过对12份不同地区不同质地的土壤样品中大丽轮枝菌及内参菌株回收效率的测定发现使用内参菌株校正可以将大丽轮枝菌回收效率提高4.14‑14.10倍，更接近于理论回收效率，有效提高了大丽轮枝菌qPCR定量检测的准确性。
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公开(公告)号：CN116377098A
公开(公告)日：2023-07-04
申请号：CN202310228883.0
申请日：2023-03-10
Applicant: 中国农业大学
IPC: C12Q1/689 , C12Q1/6851 , C12N15/11 , C12R1/01
Abstract: 本发明涉及一种用于青枯病菌定量检测的组合物及其应用，属于微生物测定或检验方法技术领域。本发明提供了检测青枯病菌的组合物，所述组合物包括检测青枯病菌的引物探针，所述引物探针由特异扩增含有核苷酸序列是SEQ ID No.3第427‑514位的片段在内的DNA片段的引物对和与核苷酸序列是SEQ ID No.3第446‑461位的DNA片段特异结合的探针组成。进一步地，所述组合物还包括内参菌株和检测内参菌株的引物探针。本发明还提供所述组合物在检测样品中青枯病菌含量的方法。本发明提供的组合物和方法通过校正环节可更准确的评估样品中青枯病菌的含量。
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公开(公告)号：CN109294964A
公开(公告)日：2019-02-01
申请号：CN201811201042.6
申请日：2018-10-16
Applicant: 中国农业大学
Abstract: 本发明公开了一种用于高通量筛选细菌群体感应淬灭剂的试剂盒及其应用。本发明首先保护一种特异DNA分子，具有两个功能片段，功能片段甲和功能片段乙；功能片段甲用于表达traR基因；traR基因编码TraR蛋白；功能片段乙自上游至下游依次包括如下元件：tra box调控元件和β-内酰胺酶基因。本发明还保护一种用于筛选群体感应淬灭剂的试剂盒，包括以上任一所述质粒和宿主菌。宿主菌为根瘤土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)N5，保藏登记号为CGMCC No.16312。所述试剂盒可用于筛选群体感应淬灭剂。本发明可以为动、植物病害的防治提供新的材料，同时也为新型农药的开发提供依据。
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公开(公告)号：CN104694658A
公开(公告)日：2015-06-10
申请号：CN201510122856.0
申请日：2015-03-19
Applicant: 中国农业大学
CPC classification number: C12Q1/6895 , C12N15/10 , C12Q1/06 , C12Q1/6844 , C12Q1/689 , C12Q2561/101 , C12Q2545/114 , C12Q2531/113
Abstract: 本发明公开了土壤中植物病原菌含量的检测方法。本发明所提供的土壤中植物病原菌含量的检测方法包括：包括S1)和S2)：S1)用提取土壤微生物DNA的方法提取待测土壤微生物DNA，得到待测土壤微生物DNA；S2)以待测土壤微生物DNA为模板，用鉴定植物病原菌的成套试剂进行荧光定量PCR，通过PCR产物的荧光强度确定待测土壤中植物病原菌的含量；提取土壤微生物DNA的方法包括S21)和S22)：S21)向土壤中加入提取缓冲液得到细胞悬液；S22)向细胞悬液中加入SDS得到细胞裂解液，所述细胞裂解液中的SDS的质量百分比浓度为4％，裂解细胞，得到裂解液；除去所述裂解液中的杂质得到所述待测土壤微生物DNA。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN104694658B
公开(公告)日：2017-07-14
申请号：CN201510122856.0
申请日：2015-03-19
Applicant: 中国农业大学
Abstract: 本发明公开了土壤中植物病原菌含量的检测方法。本发明所提供的土壤中植物病原菌含量的检测方法包括：包括S1)和S2)：S1)用提取土壤微生物DNA的方法提取待测土壤微生物DNA，得到待测土壤微生物DNA；S2)以待测土壤微生物DNA为模板，用鉴定植物病原菌的成套试剂进行荧光定量PCR，通过PCR产物的荧光强度确定待测土壤中植物病原菌的含量；提取土壤微生物DNA的方法包括S21)和S22)：S21)向土壤中加入提取缓冲液得到细胞悬液；S22)向细胞悬液中加入SDS得到细胞裂解液，所述细胞裂解液中的SDS的质量百分比浓度为4％，裂解细胞，得到裂解液；除去所述裂解液中的杂质得到所述待测土壤微生物DNA。
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公开(公告)号：CN111718917B
公开(公告)日：2022-04-05
申请号：CN201910212558.9
申请日：2019-03-20
Applicant: 中国农业大学
Abstract: 本发明公开了一种热稳定细菌群体感应信号降解酶及其应用。本发明提供了如下蛋白：SEQ ID No.1所示蛋白或其经一个或几个氨基酸残基取代和/或缺失和/或添加，或序列具99％、95％、90％、85％或者80％以上同源性且具相同功能的蛋白，或N端和/或C端连接标签后得到的融合蛋白。本发明所提供的蛋白质为新型AHL内酯酶，能降解不同侧链长度和C3位置无取代基或不同取代基(羰基和羟基)多种类型的AHL信号分子，具良好的热稳定性和储存稳定性，且对蛋白酶有较强耐受性，其活性不受一些金属离子、EDTA和尿素影响；表达相应基因显著抑制动物病原细菌铜绿假单胞毒力因子产量和植物病原细菌果胶杆菌的致病性。
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公开(公告)号：CN109294964B
公开(公告)日：2021-09-03
申请号：CN201811201042.6
申请日：2018-10-16
Applicant: 中国农业大学
Abstract: 本发明公开了一种用于高通量筛选细菌群体感应淬灭剂的试剂盒及其应用。本发明首先保护一种特异DNA分子，具有两个功能片段，功能片段甲和功能片段乙；功能片段甲用于表达traR基因；traR基因编码TraR蛋白；功能片段乙自上游至下游依次包括如下元件：tra box调控元件和β‑内酰胺酶基因。本发明还保护一种用于筛选群体感应淬灭剂的试剂盒，包括以上任一所述质粒和宿主菌。宿主菌为根瘤土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)N5，保藏登记号为CGMCC No.16312。所述试剂盒可用于筛选群体感应淬灭剂。本发明可以为动、植物病害的防治提供新的材料，同时也为新型农药的开发提供依据。
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公开(公告)号：CN111718917A
公开(公告)日：2020-09-29
申请号：CN201910212558.9
申请日：2019-03-20
Applicant: 中国农业大学
Abstract: 本发明公开了一种热稳定细菌群体感应信号降解酶及其应用。本发明提供了如下蛋白：SEQ ID No.1所示蛋白或其经一个或几个氨基酸残基取代和/或缺失和/或添加，或序列具99％、95％、90％、85％或者80％以上同源性且具相同功能的蛋白，或N端和/或C端连接标签后得到的融合蛋白。本发明所提供的蛋白质为新型AHL内酯酶，能降解不同侧链长度和C3位置无取代基或不同取代基(羰基和羟基)多种类型的AHL信号分子，具良好的热稳定性和储存稳定性，且对蛋白酶有较强耐受性，其活性不受一些金属离子、EDTA和尿素影响；表达相应基因显著抑制动物病原细菌铜绿假单胞毒力因子产量和植物病原细菌果胶杆菌的致病性。
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公开(公告)号：CN111455092A
公开(公告)日：2020-07-28
申请号：CN202010459753.4
申请日：2020-05-27
Applicant: 中国农业大学
IPC: C12Q1/6895 , C12Q1/6851 , C12N15/11 , C12N1/15 , C12R1/645
Abstract: 本发明公开了一种用于大丽轮枝菌定量PCR检测的内参菌株及其应用。本发明提供了一株用于对土壤中大丽轮枝菌qPCR定量检测结果进行校正的内参菌株，该内参菌株选用黑白轮枝菌菌株YJ3.3为出发菌株，在其基因组上插入多拷贝串联的人工构建内参DNA片段。本发明采用荧光定量PCR方法对土壤中大丽轮枝菌及定量加入的内参菌株进行检测，以内参菌株的回收效率对靶标大丽轮枝菌的回收效率进行校正。通过对12份不同地区不同质地的土壤样品中大丽轮枝菌及内参菌株回收效率的测定发现使用内参菌株校正可以将大丽轮枝菌回收效率提高4.14-14.10倍，更接近于理论回收效率，有效提高了大丽轮枝菌qPCR定量检测的准确性。
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