公开(公告)号：CN104694670B

公开(公告)日：2017-09-19

申请号：CN201510122293.5

申请日：2015-03-20

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 李广兴 ,  高睿泽 ,  任玉东 ,  白云云 ,  黄小丹

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/68 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明公开了一种猪轮状病毒反转录环节导等温扩增检测方法及应用。所述检测方法步骤如下：（1）建立RT‑LAMP反应体系，同时设立阴性对照；所述RT‑LAMP反应体系共25μL，包括：模板2μL，0.8μM FIP和BIP引物各0.5μL，0.2μM的F3和B3引物各0.25μL，2μL dNTP，5 mM MgS04，8 U Bst DNA polymerase和1×ThermoPol Buffer，1μL MLV反转录酶，用灭菌水体积补足至25μL；所述阴性对照的模板为灭菌水；（2）在恒温水浴锅中61‑65℃反应20‑60 min后，80℃终止20 min，扩增产物经琼脂糖凝胶电泳鉴定或加入2μL SYBR Green I染料，紫外灯下或肉眼观察结果。本发明为PRV的临床诊断与流行病学调查提供了一种简单、快速和准确的分子生物学诊断方法。

公开(公告)号：CN104694670A

公开(公告)日：2015-06-10

申请号：CN201510122293.5

申请日：2015-03-20

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 李广兴 ,  高睿泽 ,  任玉东 ,  白云云 ,  黄小丹

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/68 ,  C12R1/93

CPC classification number: C12Q1/701 ,  C12Q1/6844 ,  C12Q2531/119 ,  C12Q2563/107

Abstract: 本发明公开了一种猪轮状病毒反转录环节导等温扩增检测方法及应用。所述检测方法步骤如下：（1）建立RT-LAMP反应体系，同时设立阴性对照；所述RT-LAMP反应体系共25μL，包括：模板2μL，0.8μM FIP和BIP引物各0.5 μL，0.2 μM的F3和B3引物各0.25μL，2μL dNTP，5 mM MgS04，8UBst DNA polymerase和1×ThermoPol Buffer，1μL MLV反转录酶，用灭菌水体积补足至25 μL；所述阴性对照的模板为灭菌水；（2）在恒温水浴锅中61-65℃反应20-60 min后，80℃终止20 min，扩增产物经琼脂糖凝胶电泳鉴定或加入2 μL SYBR Green I染料，紫外灯下或肉眼观察结果。本发明为PRV的临床诊断与流行病学调查提供了一种简单、快速和准确的分子生物学诊断方法。