公开(公告)号：CN107904235B

公开(公告)日：2020-12-18

申请号：CN201711379297.7

申请日：2017-12-20

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 陈雅君 ,  包文龙 ,  谢福春 ,  张璐 ,  杜亚琳 ,  崔国文

IPC: C12N15/11 ,  C12N15/52 ,  C12Q1/6895

Abstract: 本发明属于生物技术育种领域，公开了一种克隆草地早熟禾谷氨酰胺合成酶基因PpG基因的方法,方法包括：(1)通过电子克隆获得PpGS1基因的部分cDNA序列，长度为1065bp。(2)以cDNA序列为靶标序列，设计特异引物，通过RT‑PCR技术进行扩增。(3)通过琼脂糖凝胶电泳，回收PCR产物。并将回收的特异产物连接到pEasy cloning vector载体上，转化感受态细胞，对阳性克隆进行测序，得到草地早熟禾PpGS1基因的部分cDNA序列，与电子克隆长度一致。(4)根据克隆得到的部分cDNA序列，设计特异引物，利用Clontech公司的SMARTTM RACE技术原理进行cDNA末端扩增，所获得的PpGS1cDNA全长为1451bp。(5)实时荧光定量PCR技术检测表明PpGS1基因具有组织特异表达性。

公开(公告)号：CN107904235A

公开(公告)日：2018-04-13

申请号：CN201711379297.7

申请日：2017-12-20

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 陈雅君 ,  包文龙 ,  谢福春 ,  张璐 ,  杜亚琳 ,  崔国文

IPC: C12N15/11 ,  C12N15/52 ,  C12Q1/6895

CPC classification number: C12N15/11 ,  C12N9/93 ,  C12Q1/6895 ,  C12Y603/01002

Abstract: 本发明属于生物技术育种领域，公开了一种克隆草地早熟禾谷氨酰胺合成酶基因PpG基因的方法,方法包括：(1)通过电子克隆获得PpGS1基因的部分cDNA序列，长度为1065bp。(2)以cDNA序列为靶标序列，设计特异引物，通过RT-PCR技术进行扩增。(3)通过琼脂糖凝胶电泳，回收PCR产物。并将回收的特异产物连接到pEasy cloning vector载体上，转化感受态细胞，对阳性克隆进行测序，得到草地早熟禾PpGS1基因的部分cDNA序列，与电子克隆长度一致。(4)根据克隆得到的部分cDNA序列，设计特异引物，利用Clontech公司的SMARTTM RACE技术原理进行cDNA末端扩增，所获得的PpGS1cDNA全长为1451bp。(5)实时荧光定量PCR技术检测表明PpGS1基因具有组织特异表达性。