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公开(公告)号：CN113151131A
公开(公告)日：2021-07-23
申请号：CN202110315377.6
申请日：2021-03-24
Applicant: 上海应用技术大学
Abstract: 本发明涉及一种产异丁香酚单加氧酶的自诱导培养基，该培养基包括以下组分：2～10g/L的葡萄糖，1～7g/L的乳糖，20～50g/L的酵母浸粉，6～7g/L的Na2HPO4，2～4g/L的KH2PO4，0.3～0.7g/L的NaCl，0.8～1.2g/L的NH4Cl，0.1～0.3g/L的MgSO4，0.0～0.1g/L的CaCl2，pH为6～7。本发明采用改进后的自诱导培养基，并利用双温度控制的方式，能有效诱导重组大肠杆菌BL21(DE3)/pET21a‑IEM的表达；该自诱导培养基以乳糖作为底物诱导目的蛋白表达，具有产酶量高，成本低，对环境友好等优点；重组异丁香酚单加氧酶的细胞酶活可达3180.8U/L。
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公开(公告)号：CN113151201A
公开(公告)日：2021-07-23
申请号：CN202110315426.6
申请日：2021-03-24
Applicant: 上海应用技术大学
Abstract: 本发明公开了一种异丁香酚单加氧酶突变体及其应用，属于生物工程领域。将来源于硝基还原假单胞菌(Pseudomonas nitroreducens)Jin1的异丁香酚单加氧酶基因进行定点突变，使其编码的氨基酸序列在第83位由赖氨酸K突变为精氨酸R，第95位由赖氨酸K突变为精氨酸R，第273位由亮氨酸突变为苯丙氨酸F。本发明所述的异丁香酚单加氧酶突变体K83R/K95R/L273F的比活是突变之前的2.1倍，在25℃、30℃、35℃下半衰期分别提高了3.0倍、12.0倍、24.7倍。本发明的异丁香酚单加氧酶突变体在氧气作用下可以在较宽的温度范围内催化底物异丁香酚苯环上的丙烯基氧化从而生成香兰素，能广泛应用于食品、化工、制药等行业，具有广阔的前景。
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公开(公告)号：CN113151131B
公开(公告)日：2023-04-28
申请号：CN202110315377.6
申请日：2021-03-24
Applicant: 上海应用技术大学
Abstract: 本发明涉及一种产异丁香酚单加氧酶的自诱导培养基，该培养基包括以下组分：2～10g/L的葡萄糖，1～7g/L的乳糖，20～50g/L的酵母浸粉，6～7g/L的Na2HPO4，2～4g/L的KH2PO4，0.3～0.7g/L的NaCl，0.8～1.2g/L的NH4Cl，0.1～0.3g/L的MgSO4，0.0～0.1g/L的CaCl2，pH为6～7。本发明采用改进后的自诱导培养基，并利用双温度控制的方式，能有效诱导重组大肠杆菌BL21(DE3)/pET21a‑IEM的表达；该自诱导培养基以乳糖作为底物诱导目的蛋白表达，具有产酶量高，成本低，对环境友好等优点；重组异丁香酚单加氧酶的细胞酶活可达3180.8U/L。
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公开(公告)号：CN113151201B
公开(公告)日：2022-12-16
申请号：CN202110315426.6
申请日：2021-03-24
Applicant: 上海应用技术大学
Abstract: 本发明公开了一种异丁香酚单加氧酶突变体及其应用，属于生物工程领域。将来源于硝基还原假单胞菌(Pseudomonas nitroreducens)Jin1的异丁香酚单加氧酶基因进行定点突变，使其编码的氨基酸序列在第83位由赖氨酸K突变为精氨酸R，第95位由赖氨酸K突变为精氨酸R，第273位由亮氨酸突变为苯丙氨酸F。本发明所述的异丁香酚单加氧酶突变体K83R/K95R/L273F的比活是突变之前的2.1倍，在25℃、30℃、35℃下半衰期分别提高了3.0倍、12.0倍、24.7倍。本发明的异丁香酚单加氧酶突变体在氧气作用下可以在较宽的温度范围内催化底物异丁香酚苯环上的丙烯基氧化从而生成香兰素，能广泛应用于食品、化工、制药等行业，具有广阔的前景。
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