一种提高遗传编辑率的愈伤组织特异CRISPR/Cas9基因编辑系统及其应用

    公开(公告)号:CN117448369A

    公开(公告)日:2024-01-26

    申请号:CN202311390311.9

    申请日:2023-10-25

    Applicant: 上海大学

    Abstract: 本发明涉及一种提高遗传编辑率的愈伤组织特异CRISPR/Cas9基因编辑系统及其应用,包括sgRNA转录单元和Cas9转录单元,所述sgRNA转录单元由顺次连接的启动子、靶向目标基因的gRNA基因和终止子组成,所述Cas9转录单元由顺次连接的植物愈伤组织特异表达启动子和Cas9基因组成,所述植物愈伤组织特异表达启动子包括ZmCTA1启动子或ZmPLTP启动子,所述ZmCTA1启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,所述ZmPLTP启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。与现有技术相比,本发明愈伤组织特异CRISPR/Cas9基因编辑系统能在植物愈伤组织中高效表达并能遗传编辑。

    一种玉米自交系双载体遗传转化系统、其构建方法及其应用

    公开(公告)号:CN115386589A

    公开(公告)日:2022-11-25

    申请号:CN202210502156.4

    申请日:2022-05-09

    Applicant: 上海大学

    Inventor: 祁巍巍 石园

    Abstract: 本发明涉及一种玉米自交系双载体遗传转化系统、其构建方法及其应用,能优化玉米自交系遗传转化效率的双载体遗传转化体系的建立,该体系使难以转化且重要的玉米品系能进行高效转化。该体系首先构建pHB‑ZmBBM‑ZmWUS诱导载体和pCAMBIA3301‑GFP报告载体,并利用基因枪轰击结合农杆菌介导法转化玉米自交系,使玉米自交系郑58、PH4CV和Mo17实现转化并获得转基因植株。其中,转基因郑58转化率最高,且其整个转化周期仅52天,比传统转化周期缩短30天。双载体遗传转化体系的建立大大缩短了转化周期,从而有助于玉米优质性状的遗传改良。

    用于检测玉米3906H基因的特异性引物组及其应用

    公开(公告)号:CN110283924A

    公开(公告)日:2019-09-27

    申请号:CN201910306500.0

    申请日:2019-04-17

    Applicant: 上海大学

    Abstract: 本发明涉及一种用于检测玉米3906H基因的特异性引物组及其应用。扩增该3906H基因左侧DNA片段的一对特异性引物3906HS1的碱基序列为:正向引物从5′端至3′端为:AACAAGTGACGCTCGGAGATAC;反向引物从5′端至3′端为:GCCTGTTTGGTAAGCACTGGTG;扩增该3906H基因右侧DNA片段的一对特异性引物3906HS12的碱基序列为:正向引物从5′端至3′端为:TCGGAATCTCACACCAAACA;反向引物从5′端至3′端为:TTGCATCCAACTGTTTCCAA。利用这两对特异性引物组能对玉米任何时期和任何组织的DNA进行基因型鉴定,检测杂交育种子代各单株中3906H基因的存在与否以及杂合或纯合状态。这种检测方法的准确性高,操作简单,为利用3906H基因的DNA分子标记辅助育种提供重要的技术手段。

    玉米胚乳特异表达启动子50kDzein启动子的克隆及其应用

    公开(公告)号:CN104140966A

    公开(公告)日:2014-11-12

    申请号:CN201410147127.6

    申请日:2014-08-27

    Applicant: 上海大学

    CPC classification number: Y02A40/162

    Abstract: 本发明涉及一种玉米胚乳特异表达启动子50kD zein启动子及其克隆方法。本发明首次分离到一个可在玉米胚乳中特异性表达的启动子——50kD zein基因启动子。该启动子具有SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列,或该序列经取代、缺失和/或添加一个或几个核苷酸且同等功能的由其衍生的核苷酸序列。本发明从克隆玉米胚乳特异表达启动子50kD zein启动子入手,通过对50kD zein启动子的功能分析,从实验水平上验证了该启动子适用于启动目标基因在玉米胚乳中特异性表达,而在其他组织中低表达或不表达。为植物基因工程表达载体构建提供了合适的调控元件,为实验室其他课题的研究进行提供了新的材料。

    扩增检测玉米dek10基因用分子标记的特异性引物组及其应用

    公开(公告)号:CN108660242B

    公开(公告)日:2021-04-09

    申请号:CN201810400094.X

    申请日:2018-04-28

    Applicant: 上海大学

    Abstract: 本发明涉及一种扩增检测玉米dek10基因用分子标记的特异性引物组及其应用。该特异性引物组中扩增该dek10基因左侧DNA片段的一对特异性引物AC204.28的碱基序列为:正向引物从5′端至3′端为:TGACGATGGTCCTTGATTCT;反向引物从5′端至3′端为:CCGTGGTCCGTAGCTC;扩增该dek10基因右侧DNA片段的一对特异性引物GM168.7的碱基序列为:正向引物从5′端至3′端为:GTTTCACTTTCTACCCTCGC;反向引物从5′端至3′端为:ATTAATTAAGAACTGCAGCAGGA。利用这两对特异性引物组能对玉米任何时期和任何组织的DNA进行基因型鉴定,检测杂交育种子代各单株中dek10基因的存在与否以及杂合或纯合状态。这种检测方法的准确性高,操作简单,为利用dek10基因的DNA分子标记辅助育种提供重要的技术手段。

    扩增检测玉米dek33基因用分子标记的特异性引物组及其应用

    公开(公告)号:CN108411025B

    公开(公告)日:2021-04-09

    申请号:CN201810401187.4

    申请日:2018-04-28

    Applicant: 上海大学

    Abstract: 本发明涉及一种扩增检测玉米dek33基因用分子标记的特异性引物组及其应用。该特异性引物组中扩增该dek33基因左侧DNA片段的一对特异性引物AC208.4的碱基序列为:正向引物从5′端至3′端为:CTACAGGAAGAGCACAAGCG;反向引物从5′端至3′端为:GGCAGAAGAACGACAAGGAA;扩增该dek33基因右侧DNA片段的一对特异性引物AC211.14的碱基序列为:正向引物从5′端至3′端为:AAATCAACGGGGAGAGCCG;反向引物从5′端至3′端为:GGTCGGACACACATTGGTTA。利用这两对特异性引物组能对玉米任何时期和任何组织的DNA进行基因型鉴定,检测杂交育种子代各单株中dek33基因的存在与否以及杂合或纯合状态。这种检测方法的准确性高,操作简单,为利用dek33基因的DNA分子标记辅助育种提供重要的技术手段。

    用于检测玉米Dek41基因的特异性引物组及其应用

    公开(公告)号:CN111961739A

    公开(公告)日:2020-11-20

    申请号:CN202010534319.8

    申请日:2020-06-12

    Applicant: 上海大学

    Abstract: 本发明公开了一种用于检测玉米Dek41基因的特异性引物组及其应用。该特异性引物组中扩增该Dek41基因左侧DNA片段的一对特异性引物Dek41S1的碱基序列,并扩增该Dek41基因右侧DNA片段的一对特异性引物Dek41S11的碱基序列。利用这两对特异性引物组能对玉米任何时期和任何组织的DNA进行基因型鉴定,检测杂交育种子代各单株中Dek41基因的存在与否以及杂合或纯合状态。这种检测方法的准确性高,操作简单,为利用Dek41基因的DNA分子标记辅助育种提供重要的技术手段。本发明对显性分子标记的获得和鉴定是对控制玉米籽粒缺陷农艺性状的Dek41基因进行DNA分子标记辅助育种的基础。

    用于扩增检测玉米5512J基因的分子标记的特异性引物组及其应用

    公开(公告)号:CN106929590B

    公开(公告)日:2020-10-16

    申请号:CN201710263104.5

    申请日:2017-04-21

    Applicant: 上海大学

    Abstract: 本发明涉及一种用于扩增检测玉米5512J基因的分子标记的特异性引物组及其应用。该分子标记组的第一对碱基序列为:正向引物从5′端至3′端为:GCAGAGTTGGAGACAAGTTCGG;反向引物从5′端至3′端为:CACAAGTAATGTTTGGGGTAGGC;该分子标记组的第二对碱基序列为:正向引物从5′端至3′端为:GCAACGAGTGAGCGAGATGAG;反向引物从5′端至3′端为:GCCATGTCGCTCTGGTATACG。利用这两个分子标记能对玉米任何时期和任何组织的DNA进行基因型鉴定,检测杂交育种子代各单株中5512J基因的存在与否以及杂合或纯合状态。这种检测方法的准确性高,操作简单,为利用5512J基因的DNA分子标记辅助育种提供重要的技术手段。

    一种人源溶菌酶蛋白基因、其表达载体的构建方法及其应用

    公开(公告)号:CN115386561B

    公开(公告)日:2024-07-16

    申请号:CN202210501552.5

    申请日:2022-05-09

    Applicant: 上海大学

    Abstract: 本发明涉及一种人源溶菌酶蛋白基因、其表达载体的构建方法及其应用,本发明运用PTF102载体与经过玉米密码子优化后人工合成的人源溶菌酶基因片段进行连接,通过农杆菌介导的玉米幼胚转化实验获得了表达人源溶菌酶蛋白的独立转基因事件。通过对后代样本进行生化成分的分析,发现人源溶菌酶蛋白可以在胚乳中稳定的表达,并且能够在成熟籽粒的胚乳中积累。经过密码子优化后的人源溶菌酶蛋白具有抑菌活性,对革兰氏阳性菌有明显的抑菌作用,而对革兰氏阴性菌的抑制作用不明显。

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