-
公开(公告)号：CN1289691C
公开(公告)日：2006-12-13
申请号：CN03113853.5
申请日：2003-03-04
Applicant: 中国人民解放军基因工程研究所
Abstract: 本发明公开了一种病原微生物诊断型基因芯片的快速检测方法，包括以下步骤：(1)玻片的准备；(2)探针准备：采用PCR扩增病原体全基因组的各个基因和特异性片段，探针长度从数百到数千碱基不等，浓度在0.25～0.5μg/μL；(3)芯片制备：采用基因芯片点样仪进行点样；(4)打印后处理；(5)样品的处理：在PCR扩增过程中，Cy5-dUTP进行掺入标记，在标记前或标记后引入限制性酶切，使获得片段长度在200～600bps之间；(6)杂交：2×杂交明冲液的配方为60%甲酰胺、12×SSC、0.24%SDS；(7)杂交后清洗；(8)扫描检测。本发明具有标记效率高、杂交检测结果稳定、杂交时间大大病短等优点，可将杂交时间从传统的16～20小时缩短到10分钟，尤其适用于临床感染性疾病的诊断。
-
公开(公告)号：CN1473940A
公开(公告)日：2004-02-11
申请号：CN02134540.6
申请日：2002-08-09
Applicant: 中国人民解放军基因工程研究所
Abstract: 本发明公开了一种限制性荧光标记方法，该方法依次包括以下步骤：(1)以限制性核酸内切酶消化由样品核酸提取纯化后反转录获得的cDNA或者以多对针对多种靶基因而设计的引物进行多重PCR扩增获得的扩增产物，产生许多大小较为一致的限制性基因片段；(2)设计接头，与上述限制性酶切片段连接；(3)根据上述限制性内切酶位点与接头序列设计PCR通用引物，并在上述引物的5′端标记上荧光分子；(4)以荧光标记的通用引物进行PCR扩增样品，该扩增样品经纯化后与DNA芯片杂交。本发明可显著增强杂交信号，并同时显著减少荧光物用量，大大提高芯片检测的灵敏度，尤其适合临床病原体基因的检测芯片。
-
公开(公告)号：CN1329523C
公开(公告)日：2007-08-01
申请号：CN02134540.6
申请日：2002-08-09
Applicant: 中国人民解放军基因工程研究所
IPC: C12Q1/68 , C12N15/10 , G01N33/533 , C12P19/34
Abstract: 本发明公开了一种限制性荧光标记方法，该方法依次包括以下步骤：(1)以限制性核酸内切酶消化由样品核酸提取纯化后反转录获得的cDNA或者以多对针对多种靶基因而设计的引物进行多重PCR扩增获得的扩增产物，产生许多大小较为一致的限制性基因片段；(2)设计接头，与上述限制性酶切片段连接；(3)根据上述限制性内切酶位点与接头序列设计PCR通用引物，并在上述引物的5′端标记上荧光分子；(4)以荧光标记的通用引物进行PCR扩增样品，该扩增样品经纯化后与DNA芯片杂交。本发明可显著增强杂交信号，并同时显著减少荧光物用量，大大提高芯片检测的灵敏度，尤其适合临床病原体基因的检测芯片。
-
公开(公告)号：CN1584052A
公开(公告)日：2005-02-23
申请号：CN200410027316.6
申请日：2004-05-26
Applicant: 中国人民解放军基因工程研究所
IPC: C12Q1/68
Abstract: 本发明公开了一种新型基因芯片表面的处理方法，该处理方法首先采用硅烷化试剂对玻片进行预处理；然后利用高分子聚合反应使丙烯酸和丙烯酰胺单体在玻片表面聚合，形成共价连接；在聚合反应发生的同时中引入活化分子，使其与聚合物中的酰胺基团发生化学反应，形成对氨基敏感的化学表面。用本发明方法处理的芯片表面具有稳定性好、固定效率高、操作流程简单、处理成本低的特点。
-
公开(公告)号：CN100359021C
公开(公告)日：2008-01-02
申请号：CN200510033396.0
申请日：2005-03-07
Applicant: 中国人民解放军基因工程研究所
Abstract: 本发明公开了一种通用引物联合标记法，该方法设计了一种与病毒、细菌和人类基因同源性较低的通用引物U和随机通用引物UNN，通过优化的两轮扩增可以同时对各种微量的单链或双链DNA样品进行大量扩增标记并用于临床检测型芯片的杂交，从而能检测多种微量的临床样品。与常用的样品标记方法比较，本发明是一种高效、灵敏的荧光标记方法。
-
Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN1231600C
公开(公告)日：2005-12-14
申请号：CN200310112066.1
申请日：2003-11-07
Applicant: 中国人民解放军基因工程研究所
Abstract: 本发明公开了一种消减杂交文库构建方法，该方法包括以下步骤：(1)消减杂交装置的制备；(2)检测组和驱动组的酶切；(3)驱动组的固定；(4)检测组连接接头；(5)进行消减杂交；(6)消减产物的分组扩增；(7)消减杂交文库的构建。与传统的物理消减杂交方法相比，本发明具有以下优点：1)消减杂交装置成本低，制作简单；2)尼龙膜与核酸分子以共价键结合，结合牢固；3)在杂交过程中可控制杂交温度和时间；4)可根据需要控制杂交轮次；5)洗脱体积可按需要控制在数十微升，便于进一步的操作；6)试验操作简单，可重复性好；7)在消减杂交后进行PCR，避免了假阳性的出现；8)消减后进行分组PCR，可使低丰度的差异表达cDNA扩增。
-
公开(公告)号：CN1683563A
公开(公告)日：2005-10-19
申请号：CN200510033396.0
申请日：2005-03-07
Applicant: 中国人民解放军基因工程研究所
Abstract: 本发明公开了一种通用引物联合标记法，该方法设计了一种与病毒、细菌和人类基因同源性较低的通用引物U和随机通用引物UNN，通过优化的两轮扩增可以同时对各种微量的单链或双链DNA样品进行大量扩增标记并用于临床检测型芯片的杂交，从而能检测多种微量的临床样品。与常用的样品标记方法比较，本发明是一种高效、灵敏的荧光标记方法。
-
公开(公告)号：CN1526829A
公开(公告)日：2004-09-08
申请号：CN03113853.5
申请日：2003-03-04
Applicant: 中国人民解放军基因工程研究所
Abstract: 本发明公开了一种病原微生物诊断型基因芯片的快速检测方法，包括以下步骤：(1)玻片的准备；(2)探针准备：采用PCR扩增病原体全基因组的各个基因和特异性片段，探针长度从数百到数千碱基不等，浓度在0.25～0.5μg/μL；(3)芯片制备：采用基因芯片点样仪进行点样；(4)打印后处理；(5)样品的处理：在PCR扩增过程中，Cy5－dUTP进行掺入标记，在标记前或标记后引入限制性酶切，使获得片段长度在200～600bps之间；(6)杂交：2×杂交明冲液的配方为60％甲酰胺、12×SSC、0.24％SDS；(7)杂交后清洗；(8)扫描检测。本发明具有标记效率高、杂交检测结果稳定、杂交时间大大病短等优点，可将杂交时间从传统的16～20小时缩短到10分钟，尤其适用于临床感染性疾病的诊断。
-
公开(公告)号：CN1271216C
公开(公告)日：2006-08-23
申请号：CN200410027316.6
申请日：2004-05-26
Applicant: 中国人民解放军基因工程研究所
IPC: C12Q1/68
Abstract: 本发明公开了一种基因芯片表面的处理方法，该处理方法首先采用硅烷化试剂对玻片进行预处理；然后利用高分子聚合反应使丙烯酸和丙烯酰胺单体在玻片表面聚合，形成共价连接；在聚合反应发生的同时中引入活化分子，使其与聚合物中的酰胺基团发生化学反应，形成对氨基敏感的化学表面。用本发明方法处理的芯片表面具有稳定性好、固定效率高、操作流程简单、处理成本低的特点。
-
公开(公告)号：CN1542138A
公开(公告)日：2004-11-03
申请号：CN200310112066.1
申请日：2003-11-07
Applicant: 中国人民解放军基因工程研究所
Abstract: 本发明公开了一种消减杂交文库构建方法，该方法包括以下步骤：(1)消减杂交装置的制备；(2)检测组和驱动组的酶切；(3)驱动组的固定；(4)检测组连接接头；(5)进行消减杂交；(6)消减产物的分组扩增；(7)消减杂交文库的构建。与传统的物理消减杂交方法相比，本发明具有以下优点：1)消减杂交装置成本低，制作简单；2)尼龙膜与核酸分子以共价键结合，结合牢固；3)在杂交过程中可控制杂交温度和时间；4)可根据需要控制杂交轮次；5)洗脱体积可按需要控制在数十微升，便于进一步的操作；6)试验操作简单，可重复性好；7)在消减杂交后进行PCR，避免了假阳性的出现；8)消减后进行分组PCR，可使低丰度的差异表达cDNA扩增。
-
-
-
-
-
-
-
-
-
Search Results
13
records
(took 0.042 seconds)
