一种大黄鱼虹彩病毒的TaqMan探针法荧光定量PCR检测试剂盒及制备方法

    公开(公告)号:CN111979355A

    公开(公告)日:2020-11-24

    申请号:CN202010898385.3

    申请日:2020-08-31

    Abstract: 本发明公开了一种大黄鱼虹彩病毒的TaqMan探针法荧光定量PCR检测试剂盒及制备方法,本发明以大黄鱼虹彩病毒LYCIV中的Laminin-like保守区序列作为扩增靶序列,设计合成了一对特异性引物及对应的TaqMan探针,建立了LYCIV TaqMan探针法荧光定量PCR检测方法,并开发成简便、快速、实用的检测试剂盒,本发明引物和探针的序列如下:正向引物F:5’-CGCTTGACCAAACAATCTTC-3’;反向引物R:5’-ATGAGCAATGGCGACCC-3’;荧光探针Q:5’-6-FAM–CTTCTTCTGTTGCTGACTGTGGCGTGTACTC-BHQ1-3’。

    大黄鱼IFNc基因大肠杆菌表达产物的制备方法与应用

    公开(公告)号:CN109517775A

    公开(公告)日:2019-03-26

    申请号:CN201811362411.X

    申请日:2018-11-15

    Abstract: 本发明涉及一种大黄鱼IFNc基因大肠杆菌表达产物的制备方法与应用,本发明通过分子生物学手段,将大黄鱼干扰素c(IFNc基因)克隆后连接至大肠杆菌表达载体中,通过转化,诱导表达,获得重组表达产物,具体包括以下步骤:基因克隆、重组表达载体的构建、转化入大肠杆菌、IPTG诱导及表达产物的纯化等步骤。所获得的表达产物可诱导大黄鱼外周血白细胞表达抗病毒蛋白基因如Mx1、PKR和ISG15。

    抗大黄鱼IgM单克隆抗体及其制备方法

    公开(公告)号:CN109400706A

    公开(公告)日:2019-03-01

    申请号:CN201811360852.6

    申请日:2018-11-15

    Inventor: 陈新华 黄宇鹏

    Abstract: 抗大黄鱼IgM单克隆抗体及其制备方法。抗大黄鱼IgM单克隆抗体为杂交瘤细胞株IgM-9G7。制备大黄鱼IgM抗原;制备杂交瘤细胞株IgM-9G7;制备抗大黄鱼IgM的单克隆抗体。大黄鱼IgM单克隆抗体是由杂交瘤细胞株IgM-9G7产生、对大黄鱼IgM具有特异性的抗体。该细胞分泌的免疫球蛋白能够高效特异性结合大黄鱼IgM,最高效价达到2×104。将纯化的大黄鱼IgM免疫动物,取其产生抗大黄鱼IgM单克隆抗体的脾细胞与骨髓瘤细胞融合获得能够分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株,该细胞株能分泌抗大黄鱼IgM的单克隆抗体。此抗体特异性高,灵敏度高,可用于大黄鱼IgM的结构分析、免疫应答水平检测等。

    一种大黄鱼SOCS1基因启动子及其应用

    公开(公告)号:CN119842711A

    公开(公告)日:2025-04-18

    申请号:CN202510121197.2

    申请日:2025-01-26

    Abstract: 本发明属于基因工程领域,尤其涉及一种大黄鱼SOCS1基因启动子及其应用。所述大黄鱼SOCS1基因启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。将所述大黄鱼SOCS1基因启动子构建至pGL3.0载体,转染至鲤上皮瘤细胞(EPC)具有较高的基础活性,突变干扰素刺激响应元件(ISRE)基序,大黄鱼SOCS1基因启动子的活性显著下降;在病毒类似物poly(I:C)刺激下,该所述大黄鱼SOCS1基因启动子的活性进一步提高,而突变的启动子活性下降。本发明提供的所述大黄鱼SOCS1基因启动子可用于启动目的基因表达、鱼类抗病毒免疫机制研究及鱼类转基因育种。

    一种靶向抑制大黄鱼SOCS3基因表达的miRNA模拟物及其应用

    公开(公告)号:CN119842709A

    公开(公告)日:2025-04-18

    申请号:CN202510120762.3

    申请日:2025-01-26

    Abstract: 本发明公开了一种抑制大黄鱼SOCS3基因表达的miRNA模拟物及其应用,属于生物技术与基因工程领域。所述miRNA为miR‑181b,其核苷酸序列如SEQ ID NO .2所示。本发明公开了miR‑181b的模拟物,所述模拟物由正义链和反义链合成,其核苷酸序列如SEQ ID NO .3~SEQ ID NO .4所示,在大黄鱼原代淋巴细胞中转染miR‑181b模拟物,可显著降低大黄鱼SOCS3基因的mRNA水平,促进T、B淋巴细胞增殖,从而增强适应性免疫反应。因此,miR‑181b模拟物具有开发大黄鱼免疫调节剂的潜在应用价值。

    一种调控大黄鱼淋巴细胞增殖与分化的miRNA模拟物及其应用

    公开(公告)号:CN119709755A

    公开(公告)日:2025-03-28

    申请号:CN202510179021.2

    申请日:2025-02-18

    Abstract: 本发明公开了一种调控大黄鱼淋巴细胞增殖与分化的miRNA模拟物及其应用,属于分子生物技术与基因工程领域。所述miRNA为miR‑146a,本发明提供miR‑146a模拟物由正义链和反义链合成,其正义链序列为5'‑UGAGAACUGAAUUCCAUAGAUGG‑3',反义链序列为5'‑ AUCUAUGGAAUUCAGUUCUCAUU ‑3';该miR‑146a模拟物可在体内外显著促进大黄鱼T、B淋巴细胞的增殖,并促进大黄鱼T淋巴细胞向Th1、Th2型细胞方向分化,抑制其向Th17型细胞方向分化,从而增强大黄鱼的适应性免疫反应。因此miR‑146a模拟物具有开发成为大黄鱼免疫调节剂的潜在应用价值。

    一种抗菌肽RMR26及其制备方法和应用

    公开(公告)号:CN115925814B

    公开(公告)日:2024-07-05

    申请号:CN202210837964.6

    申请日:2022-07-16

    Abstract: 本发明公开了一种抗菌肽RMR26及其制备方法和应用,其氨基酸序列为Arg‑Ser‑Thr‑Lys‑Ala‑Gly‑Val‑Ile‑Phe‑Pro‑Val‑Gly‑Arg‑Met‑Leu‑Arg‑Tyr‑Ile‑Lys‑Arg‑Gly‑Leu‑Pro‑Lys‑Tyr‑Arg。抗菌肽RMR26可以用固相化学法合成。本发明所得到的抗菌肽RMR26具有较强的抑菌活性、较弱的溶血活性和较低的细胞毒性,可作为抗生素替代品使用,应用于药品抗菌制剂、食品防腐剂、养殖业饲料添加剂和化妆品防腐剂等。

    一种基于受精卵卵壳软化的大黄鱼高效基因组编辑方法

    公开(公告)号:CN117660544A

    公开(公告)日:2024-03-08

    申请号:CN202311667175.3

    申请日:2023-12-06

    Abstract: 本发明公开了一种基于受精卵卵壳软化的大黄鱼高效基因组编辑方法,包括以下步骤:首先获取大黄鱼自然受精的受精卵,利用5mg/ml的链霉蛋白酶在24℃水温下消化受精卵30min以使卵壳软化,将Cas9蛋白、sgRNA及酚红混合,采用显微注射方法,将混合物注射入胚盘期受精卵中,孵化48h后,可以获得存活率64%,外源靶基因突变率最高达86.3%。本发明第一次利用卵壳软化的方法在海水鱼中建立了基因组编辑方法,相比于以往的基因组编辑方法,该基因组编辑方法不仅操作简单,而且可大大提高基因组编辑受精卵的孵化率和基因组编辑效率,为开展大黄鱼基因的功能研究和大黄鱼遗传改良提供了新的技术手段。

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