转人神经生长因子基因猪的制备方法

    公开(公告)号:CN111500641A

    公开(公告)日:2020-08-07

    申请号:CN202010402846.3

    申请日:2020-05-13

    Abstract: 本发明公开了一种转人神经生长因子基因猪的制备方法。该方法包括如下步骤:a、构建靶向pNGF基因外显子的CRISPR/Cas9系统表达载体;b、构建提供hNGF基因的同源重组载体;c、将CRISPR/Cas9系统表达载体与hNGF基因的同源重组载体共转染猪耳成纤维细胞;d、转染后的猪耳成纤维细胞经筛选后,获得阳性细胞系,并通过体细胞克隆获得转人神经生长因子的转基因猪。本发明通过定点基因重组的方式,将hNGF基因插入猪pNGF基因位点,从而获得的转人神经生长因子基因猪,可以表达人神经生长因子而不表达猪神经生长因子,避免了在猪唾液中收集人源NGF时,其中还混有猪源NGF的现状,也避免其在用作药物治疗时的免疫原性问题,更加安全和有效。

    一种卵母细胞培养液及提高卵母细胞质量的体外培养方法

    公开(公告)号:CN110846272A

    公开(公告)日:2020-02-28

    申请号:CN201911231323.0

    申请日:2019-12-05

    Abstract: 本发明提供了一种卵母细胞培养液,该培养液中含有成熟的卵泡液。成熟的卵泡液相对于未成熟的卵泡液,成熟的卵泡液对卵母细胞体外成熟有积极作用的物质丰度更高,离成熟期越近的卵泡,它的卵泡液越能促进卵母细胞IVM,并改善其质量。使用体内成熟卵泡液作为卵母细胞体外成熟培养液的组分能有效提高卵母细胞的质量,并且能降低卵母细胞中的ROS含量。由此。不仅可以用来改善各种物种(如:牛、羊等)的卵母细胞体外成熟,提高制备优质的体外受精胚胎及克隆胚胎的生产率,还可供人类辅助生殖中卵母细胞体外培养成熟的运用提供参考,以改进现有的卵母细胞体外成熟的培养体系,从而促进生物医学的发展。

    一种针对组织的自然染色质免疫沉淀处理方法

    公开(公告)号:CN110320357A

    公开(公告)日:2019-10-11

    申请号:CN201910575929.X

    申请日:2019-06-28

    Abstract: 本发明属于生物技术领域,具体涉及一种针对组织的自然染色质免疫沉淀处理方法。本发明采用Douncing Buffer和特殊研磨手段等方式裂解猪骨骼肌组织,初步获得组织悬液,在微链球菌核酸酶的消化下,获得了高产量的且质量高的染色质,然后采用磁珠吸附的方式去除背景DNA,得到预清除背景DNA的上清液;最后将预清除背景DNA的上清液进行免疫沉淀、样品清洗、洗脱、DNA纯化和检测,该方法获得的染色质的产量和质量很高,适用于肝脏、脑、肺和胎盘等组织以及哺乳动物早期胚胎细胞核的收集,利用该方法可以使完整细胞核的产量最大化。同时,该方法保持了染色质制备过程中抗体识别表位的完整性。

    ssc-miR-199a-3p在促进猪胚胎着床中的应用

    公开(公告)号:CN116376811A

    公开(公告)日:2023-07-04

    申请号:CN202310162741.9

    申请日:2023-02-22

    Abstract: 本发明提供了ssc‑miR‑199a‑3p在促进猪胚胎着床中的应用,本发明的研究发现,促进ssc‑miR‑199a‑3p的表达,可以提高猪胚胎滋养层细胞增殖/迁移能力,进而促进猪胚胎着床;进一步研究发现,ssc‑miR‑199a‑3p通过抑制ACSL4基因的表达发挥促进猪胚胎着床的作用,通过抑制猪ACSL4基因的表达可以提高猪胚胎着床的成功率。本发明能够解决养猪业自发性胎儿丢失的问题,对于养猪业具有重要的价值和意义。

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