一种基于核酸适体的可捕获癌细胞的微流控芯片及其制备和癌细胞的分离方法

    公开(公告)号:CN103087899A

    公开(公告)日:2013-05-08

    申请号:CN201310017262.4

    申请日:2013-01-17

    Applicant: 湖南大学

    Abstract: 本发明公开了一种基于核酸适体的可捕获癌细胞的微流控芯片,由上层聚合物芯片和下层玻片载体可逆封接而成,两者之间设有细胞捕获通道,通道底表面表现为凹凸不平;底表面上固定有亲和素。微流控芯片的制备包括以下步骤:先通过光刻制作芯片模具,再浇铸得到聚合物芯片;玻片载体经氢氟酸处理后与聚合物芯片键合;最后在细胞捕获通道内固定亲和素制得微流控芯片。本发明的微流控芯片可用于癌细胞的分离,分离时先向样本中加入修饰有生物素的核酸适体,孵育;将孵育后的混合溶液通入微流控芯片中,混合溶液中的目标癌细胞通过生物素与亲和素的结合,实现对目标癌细胞的分离。本发明具有细胞捕获效率高、操作简便、通用性强、成本低等优点。

    可用于尿酸仪检测目标基因的黄嘌呤氧化酶-DNA复合物及其制备方法和在检测中的应用

    公开(公告)号:CN102703596A

    公开(公告)日:2012-10-03

    申请号:CN201210200416.9

    申请日:2012-06-18

    Applicant: 湖南大学

    Abstract: 本发明公开了一种黄嘌呤氧化酶-DNA复合物,其分子一端为黄嘌呤氧化酶,另一端为辅助探针,二者是通过sulfo-SMCC作为原料反应后生成的连接臂进行连接,连接臂包括4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷基团。该复合物的制备方法是先将辅助探针、缓冲液等混合、孵育,然后将黄嘌呤氧化酶与sulfo-SMCC振荡混合反应,最后将得到的辅助探针溶液和黄嘌呤氧化酶溶液混合。本发明的复合物可通过尿酸仪来检测目标DNA,其方法是取金膜预处理后加入捕获探针构建传感器;再加入待测目标溶液杂交后洗涤,加入复合物溶液杂交后洗涤;最后加入黄嘌呤,并用尿酸仪对反应产物进行检测。本发明的优点体现在操作方便、灵敏度高且选择性高。

    利用微流控芯片筛选蛋白质的核酸适体的方法

    公开(公告)号:CN102321616A

    公开(公告)日:2012-01-18

    申请号:CN201110273017.0

    申请日:2011-09-15

    Applicant: 湖南大学

    Abstract: 本发明公开了一种利用微流控芯片筛选蛋白质的核酸适体的方法,包括以下步骤:将预先设定的起始核酸文库先与非靶标蛋白质孵育,得到优化核酸文库;然后将靶标蛋白质先与微珠孵育,将修饰有靶标蛋白质的微珠置入一微流控芯片通道内;再将优化核酸文库通入微流控芯片通道内,经过冲洗、洗脱,得到初筛核酸文库;对初筛核酸文库进行PCR扩增,扩增产物通过亲和柱分离,变性解链、脱盐后形成次一级核酸文库;以次一级核酸文库替代起始核酸文库并重复前述步骤,直至得到含目标核酸适体的核酸文库。本发明的方法具有通用性强、筛选时间短、筛选效率高、筛选效果好等优点。

    利用纳米金颗粒和电洗脱实现单碱基错配识别的方法

    公开(公告)号:CN100590202C

    公开(公告)日:2010-02-17

    申请号:CN200610032471.6

    申请日:2006-10-27

    Applicant: 湖南大学

    Abstract: 一种利用纳米金颗粒和电洗脱实现单碱基错配识别的方法,包括以下步骤:固定DNA探针,加入目标DNA,反复冲洗,检测目标DNA杂交后的SPR响应信号;加入巯基DNA修饰的纳米金颗粒杂交,反复冲洗,检测巯基DNA杂交后的SPR响应信号;金属薄膜表面荷负电进行电洗脱,检测电洗脱后的响应信号;若电洗脱后的SPR响应信号小于巯基DNA杂交后的SPR响应信号,则可知加入的目标DNA是单碱基错配的DNA。本发明方法既可除去单碱基错配目标DNA所造成的干扰,又可确保cDNA杂交引起的信号变化在电洗脱中不受影响;采用的DNA探针设计简单、传感芯片可重复利用。

    利用纳米金颗粒催化增长提高表面等离子体共振传感器灵敏度的方法

    公开(公告)号:CN100429503C

    公开(公告)日:2008-10-29

    申请号:CN200610031234.8

    申请日:2006-02-17

    Applicant: 湖南大学

    Abstract: 本发明公开了一种利用纳米金颗粒催化增长提高表面等离子体共振传感器灵敏度的方法,它是在表面等离子体共振传感器的金属薄膜表面包被一层20~35nm厚的二氧化硅SiO2薄层,利用纳米金颗粒催化增长增强了表面等离子体共振信号,提高了表面等离子体共振SPR传感器的灵敏度。本发明使纳米金颗粒催化增长可以应用于表面等离子体共振(SPR)传感器,在纳米金颗粒催化增长的过程中,金或者银的离子被催化还原沉积在纳米金颗粒表面的同时,不会被沉积在金属薄膜表面而引起背景增高。该方法简单易行、成本低、灵敏度高。

    利用纳米金颗粒和电洗脱实现单碱基错配识别的方法

    公开(公告)号:CN1944671A

    公开(公告)日:2007-04-11

    申请号:CN200610032471.6

    申请日:2006-10-27

    Applicant: 湖南大学

    Abstract: 一种利用纳米金颗粒和电洗脱实现单碱基错配识别的方法,包括以下步骤:固定DNA探针,加入目标DNA,反复冲洗,检测目标DNA杂交后的SPR响应信号;加入巯基DNA修饰的纳米金颗粒杂交,反复冲洗,检测巯基DNA杂交后的SPR响应信号;金属薄膜表面荷负电进行电洗脱,检测电洗脱后的响应信号;若电洗脱后的SPR响应信号小于巯基DNA杂交后的SPR响应信号,则可知加入的目标DNA是单碱基错配的DNA。本发明方法既可除去单碱基错配目标DNA所造成的干扰,又可确保cDNA杂交引起的信号变化在电洗脱中不受影响;采用的DNA探针设计简单、传感芯片可重复利用。

    固定化单层DNA探针取向调控和实时监测装置

    公开(公告)号:CN2888447Y

    公开(公告)日:2007-04-11

    申请号:CN200620049854.X

    申请日:2006-01-19

    Applicant: 湖南大学

    Abstract: 一种固定化单层DNA探针取向调控和实时监测装置,包括光源、平行光管、p偏振片、棱镜、流通池、可调直流电源、光栅光谱仪和计算机,光源置于平行光管前,p偏振片置于平行光管出射口,固定于棱镜支架中的棱镜位于平行光管后,光栅光谱仪置于棱镜出射光路上,并通过数据线与计算机接口相连,流通池置于棱镜上方,该流通池由金膜和导电玻璃组成,金膜粘合于棱镜底面上,导电玻璃的玻璃层底面与金膜粘合,玻璃层底部开有进样槽,在玻璃层与金膜之间形成进样通道,位于玻璃层顶面的导电玻璃导电层与金膜分别通过导线与可调直流电源相连。本实用新型具有无需标记、非接触、对固定化单层DNA探针无损伤、结构简单,调试方便、使用成本低且快速准确等特点。

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