短乳杆菌谷氨酸脱羧酶基因的克隆、表达及应用

    公开(公告)号:CN102080090A

    公开(公告)日:2011-06-01

    申请号:CN201010567447.9

    申请日:2010-11-17

    Inventor: 梅乐和 胡升 黄俊

    Abstract: 本发明公开一种短乳杆菌谷氨酸脱羧酶基因的克隆、表达及应用。该基因来自短乳杆菌Lactobacillus brevis CGMCC NO.1306,全长1407bp,通过PCR从短乳杆菌基因组DNA中扩增获得。在该基因两端分别加上BamH I和EcoRI限制酶识别序列,与经相同限制酶消化的pET-28a(+)连接并转化大肠杆菌表达宿主菌BL21(DE3),实现了在大肠杆菌中的重组表达,表达产物谷氨酸脱羧酶分子量为53538.6Da。该重组谷氨酸脱羧酶或表达该重组酶的工程菌可将L-谷氨酸或其盐脱羧转化为γ-氨基丁酸,具有转化效率高、产物纯度高,生产效率高的优点。

    一种生物合成γ-氨基丁酸的方法

    公开(公告)号:CN1276087C

    公开(公告)日:2006-09-20

    申请号:CN200510049187.5

    申请日:2005-03-07

    Applicant: 浙江大学

    Inventor: 梅乐和 黄俊 武鸿

    Abstract: 本发明公开了一种生物合成γ-氨基丁酸的方法,其特征在于,保藏编号为:CGMCC NO.1306的短乳杆菌(Lactobacillus brevis),经琼脂斜面培养基活化后,转接于GYP种子培养基或MRS种子培养基,培养10~30小时后,以0.5%~5%的接种量接种于GYP或MRS发酵培养基中,在25℃~35℃下静置培养48h~120h,即得含菌体的发酵液,菌体离心分离收集;离心后的菌体再以灭过菌的去离子水洗涤,取0.25~2g湿菌体,悬浮于15~50mL的柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲体系中,L-谷氨酸钠含量为5mM~60mM,反应1~10小时,反应液离心即得含γ-氨基丁酸的溶液。本发明生产成本低、反应条件温和、环境污染小、方法简单、易于操作,生产效率高,并且产品纯度较高,减轻了后续分离纯化工艺。

    控制pH发醇生产γ-氨基丁酸的方法

    公开(公告)号:CN1683545A

    公开(公告)日:2005-10-19

    申请号:CN200510049189.4

    申请日:2005-03-07

    Applicant: 浙江大学

    Inventor: 梅乐和 夏江 黄俊

    Abstract: 本发明公开了一种控制pH发酵生产γ-氨基丁酸的方法。保藏编号为:CGMCC NO.1306的短乳杆菌(Lactobacillus brevis),经琼脂斜面培养基活化后,转接于GYP种子培养基中,培养25~35小时后,以5~10%的接种量接种于发酵罐中,发酵罐装液量为1~3L,搅拌转速为50~150r/min,在30℃下静置培养,对其进行pH控制发酵,发酵培养约25~40小时,待菌体生长进入稳定期,pH值回升后,连续流加1~3mol/L的盐酸,发酵培养基pH控制在5.0~5.6,继续培养约40~60h,即得含γ-氨基丁酸的发酵液。本发明的优点:在于通过在稳定期控制pH发酵,GABA的产量达到30g/L,工艺简单,环境污染小、操作方便,GABA产量高。

Patent Agency Ranking