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公开(公告)号:CN103031323A
公开(公告)日:2013-04-10
申请号:CN201110297904.1
申请日:2011-09-30
Applicant: 浙江大学宁波理工学院
Abstract: 本发明涉及一种谷氨酸脱羧酶热稳定变体G56P基因,其核苷酸序列在第56位有定点突变。研究发现,此位点突变后得到的变体基因编码的谷氨酸脱羧酶的热稳定性有所增强。本发明通过在编码野生GAD酶基因基础上进行定点突变,提高了其对应变体酶在在60℃和70℃下的热稳定性。随着酶热稳定性的提高,在工业生产过程中可以采用更高的操作温度,以提高反应速率、增加底物溶解度,有利于利用该酶通过生物转化生产GABA。
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公开(公告)号:CN103031322A
公开(公告)日:2013-04-10
申请号:CN201110297156.7
申请日:2011-09-30
Applicant: 浙江大学宁波理工学院
Abstract: 本发明涉及一种谷氨酸脱羧酶热稳定变体G311P基因,其核苷酸序列在第311位有定点突变。研究发现,此位点突变后得到的变体基因编码的谷氨酸脱羧酶的热稳定性有所增强。本发明通过在编码野生GAD酶基因基础上进行定点突变,提高了其对应变体酶在在60℃和70℃下的热稳定性。随着酶热稳定性的提高,在工业生产过程中可以采用更高的操作温度,以提高反应速率、增加底物溶解度,有利于利用该酶通过生物转化生产GABA。
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公开(公告)号:CN101921791B
公开(公告)日:2012-05-09
申请号:CN201010268769.3
申请日:2010-09-01
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种谷氨酸脱羧酶的变体基因,其碱基序列如SEQ IDNO.1所示。本发明变体基因通过在编码野生GAD酶基因基础上进行定点突变,提高了GAD在中性pH值环境的催化活力,使对应变体酶在pH 6.0条件下催化谷氨酸生成GABA的达到野生型酶的4.8倍,拓宽了酶的最适pH值范围,为利用该酶通过生物转化生产GABA创造了条件。
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公开(公告)号:CN102080090A
公开(公告)日:2011-06-01
申请号:CN201010567447.9
申请日:2010-11-17
Applicant: 浙江大学宁波理工学院
Abstract: 本发明公开一种短乳杆菌谷氨酸脱羧酶基因的克隆、表达及应用。该基因来自短乳杆菌Lactobacillus brevis CGMCC NO.1306,全长1407bp,通过PCR从短乳杆菌基因组DNA中扩增获得。在该基因两端分别加上BamH I和EcoRI限制酶识别序列,与经相同限制酶消化的pET-28a(+)连接并转化大肠杆菌表达宿主菌BL21(DE3),实现了在大肠杆菌中的重组表达,表达产物谷氨酸脱羧酶分子量为53538.6Da。该重组谷氨酸脱羧酶或表达该重组酶的工程菌可将L-谷氨酸或其盐脱羧转化为γ-氨基丁酸,具有转化效率高、产物纯度高,生产效率高的优点。
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公开(公告)号:CN101921791A
公开(公告)日:2010-12-22
申请号:CN201010268769.3
申请日:2010-09-01
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种谷氨酸脱羧酶的变体基因,其碱基序列如SEQ IDNO.1所示。本发明变体基因通过在编码野生GAD酶基因基础上进行定点突变,提高了GAD在中性pH值环境的催化活力,使对应变体酶在pH 6.0条件下催化谷氨酸生成GABA的达到野生型酶的4.8倍,拓宽了酶的最适pH值范围,为利用该酶通过生物转化生产GABA创造了条件。
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公开(公告)号:CN1276087C
公开(公告)日:2006-09-20
申请号:CN200510049187.5
申请日:2005-03-07
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种生物合成γ-氨基丁酸的方法,其特征在于,保藏编号为:CGMCC NO.1306的短乳杆菌(Lactobacillus brevis),经琼脂斜面培养基活化后,转接于GYP种子培养基或MRS种子培养基,培养10~30小时后,以0.5%~5%的接种量接种于GYP或MRS发酵培养基中,在25℃~35℃下静置培养48h~120h,即得含菌体的发酵液,菌体离心分离收集;离心后的菌体再以灭过菌的去离子水洗涤,取0.25~2g湿菌体,悬浮于15~50mL的柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲体系中,L-谷氨酸钠含量为5mM~60mM,反应1~10小时,反应液离心即得含γ-氨基丁酸的溶液。本发明生产成本低、反应条件温和、环境污染小、方法简单、易于操作,生产效率高,并且产品纯度较高,减轻了后续分离纯化工艺。
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公开(公告)号:CN1683545A
公开(公告)日:2005-10-19
申请号:CN200510049189.4
申请日:2005-03-07
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种控制pH发酵生产γ-氨基丁酸的方法。保藏编号为:CGMCC NO.1306的短乳杆菌(Lactobacillus brevis),经琼脂斜面培养基活化后,转接于GYP种子培养基中,培养25~35小时后,以5~10%的接种量接种于发酵罐中,发酵罐装液量为1~3L,搅拌转速为50~150r/min,在30℃下静置培养,对其进行pH控制发酵,发酵培养约25~40小时,待菌体生长进入稳定期,pH值回升后,连续流加1~3mol/L的盐酸,发酵培养基pH控制在5.0~5.6,继续培养约40~60h,即得含γ-氨基丁酸的发酵液。本发明的优点:在于通过在稳定期控制pH发酵,GABA的产量达到30g/L,工艺简单,环境污染小、操作方便,GABA产量高。
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