公开(公告)号：CN101343636B

公开(公告)日：2011-08-31

申请号：CN200810119705.X

申请日：2008-09-05

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 刘金华 ,  刘芹防 ,  马广鹏 ,  蒲娟 ,  王帅

IPC: C12N15/63 ,  C12N15/64 ,  C12N15/44

Abstract: 本发明公开了一种用于构建流感病毒的反向遗传系统的载体及应用。所述载体为环状载体，包含原核复制起点、筛选标记基因、多聚腺苷酸加尾信号和两个转录方向相同的启动子，所述多聚腺苷酸加尾信号位于所述两个转录方向相反的启动子的下游，其中，所述两个转录方向相同的的启动子和所述多聚腺苷酸加尾信号之间含有polI元件，所述polI元件自上游至下游依次为RNA聚合酶I启动子、连接片段和RNA聚合酶I终止子，所述连接片段含有如下1)或2)的序列：1)GGGGAGCGAAAGCAGG；2)GGTTATTAGTAGAAACAAGG。所述载体可用来构建流感病毒反向遗传系统质粒，用于病毒拯救。

公开(公告)号：CN101463362B

公开(公告)日：2011-07-20

申请号：CN200910077103.7

申请日：2009-01-15

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 刘金华 ,  刘芹防 ,  马婧姣 ,  蒲娟

IPC: C12N15/63 ,  C12N15/66 ,  C12P21/00

Abstract: 本发明公开了一种融合表达绿色荧光蛋白的表达载体及其构建方法与应用。该载体是一种环状载体，包含原核复制起点、真核复制起点、筛选标记基因和绿色荧光蛋白基因表达盒；所述绿色荧光蛋白基因表达盒自上游至下游依次由两个转录方向相同的启动子、连接片段、绿色荧光蛋白编码区基因和多聚腺苷酸加尾信号组成；所述绿色荧光蛋白编码区基因缺失起始密码子，所述连接片段含有EcoRV识别序列，所述绿色荧光蛋白编码区基因自5’末端第1位和第2位与EcoRV识别序列自5’末端的最后两位重叠；所述连接片段含有或不含有起始密码子；当所述连接片段含有起始密码子时，所述起始密码子与所述EcoRV识别序列自5’末端第一位间隔2+3n或1+3n位，n为正整数。该载体含有绿色荧光蛋白基因，且只有在插入的外源基因正确表达的情况下才能表达，从而可以有效的排除出发载体表达荧光而出现的干扰问题。

公开(公告)号：CN101343636A

公开(公告)日：2009-01-14

申请号：CN200810119705.X

申请日：2008-09-05

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 刘金华 ,  刘芹防 ,  马广鹏 ,  蒲娟 ,  王帅

IPC: C12N15/63 ,  C12N15/64 ,  C12N15/44

Abstract: 本发明公开了一种用于构建流感病毒的反向遗传系统的载体及应用。所述载体为环状载体，包含原核复制起点、筛选标记基因、多聚腺苷酸加尾信号和两个转录方向相同的启动子，所述多聚腺苷酸加尾信号位于所述两个转录方向相反的启动子的下游，其中，所述两个转录方向相同的的启动子和所述多聚腺苷酸加尾信号之间含有pol I元件，所述pol I元件自上游至下游依次为RNA聚合酶I启动子、连接片段和RNA聚合酶I终止子，所述连接片段含有如下1)或2)的序列：1)GGGGAGCGAAAGCAGG；2)GGTTATTAGTAGAAACAA GG。所述载体可用来构建流感病毒反向遗传系统质粒，用于病毒拯救。

公开(公告)号：CN101140283A

公开(公告)日：2008-03-12

申请号：CN200710176058.1

申请日：2007-10-18

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 刘金华 ,  丛彦龙 ,  蒲娟 ,  马广鹏 ,  闫春梅

IPC: G01N33/566 ,  G01N33/543

Abstract: 本发明公开了一种鉴定A型流感病毒的受体亲和特性的方法。该方法包括以下步骤：1)将待测A型流感病毒包被于酶标板；2)然后向所述酶标板中加入生物素标记的SAα2，3Gal受体和/或SAα2，6Gal受体；3)向所述酶标板中加入被亲和素标记的酶，所述酶为免疫酶技术中所用的酶；4)向所述酶标板中加入所述酶的底物进行显色反应；5)终止反应，确定A型流感病毒的受体亲和特性。本发明创造性地将待测A型流感病毒直接吸附于结合板上，通过固相直接结合方法来鉴定A型流感病毒受体亲和特性。该方法操作简单，敏感性高，特异性强，不但可用于病毒生物学特性的鉴定工作，还可为研制病毒吸附抑制性药物提供理论基础，具有极高的应用价值。