一种人源ATP合成酶的纯化方法

    公开(公告)号:CN114645025B

    公开(公告)日:2023-12-22

    申请号:CN202210387022.2

    申请日:2022-04-13

    Applicant: 南开大学

    Abstract: 本发明属于蛋白纯化技术领域,具体涉及一种人源ATP合成酶的纯化方法。本发明提供了一种人源ATP合成酶的纯化方法,制备人源线粒体粗提物,溶膜,得线粒体总蛋白溶液;通过阳离子交换柱、阴离子交换柱及凝胶排阻色谱柱的手段分离纯化人源ATP合成酶。本发明提供的纯化方法具有操作方法简单,实验成本低,时长短的特点,得到的人源ATP合成酶蛋白纯度高,生理活性好,可用于后续的结构功能及药物发现研究。

    一种人源线粒体呼吸链复合物Ⅱ的纯化方法

    公开(公告)号:CN116103251A

    公开(公告)日:2023-05-12

    申请号:CN202211600937.3

    申请日:2022-12-13

    Applicant: 南开大学

    Abstract: 本发明属于蛋白纯化技术领域,具体涉及一种人源线粒体呼吸链复合物Ⅱ的纯化方法。本发明提供的纯化方法:将人源线粒体复合物总蛋白溶液装入填装有Anti‑Flag填料的色谱柱中进行亲和柱层析纯化,将得到的人源线粒体呼吸链复合物II粗提液装入凝胶排阻色谱柱中进行凝胶排阻柱层析纯化,采用第二洗脱剂进行第二洗脱后收集第二洗脱液,得到所述人源线粒体呼吸链复合物Ⅱ纯品;所述人源线粒体复合物总蛋白溶液中的人源线粒体呼吸链复合物Ⅱ的SDHD亚基C端融合有3×Flag标签。本发明提供的纯化方法具有操作流程简单,实验成本较低,获得的人源线粒体呼吸链复合物Ⅱ纯度较高,生理活性好的优势,可用于后续的结构功能及药物发现研究。

    一种人源ATP合成酶的纯化方法

    公开(公告)号:CN114645025A

    公开(公告)日:2022-06-21

    申请号:CN202210387022.2

    申请日:2022-04-13

    Applicant: 南开大学

    Abstract: 本发明属于蛋白纯化技术领域,具体涉及一种人源ATP合成酶的纯化方法。本发明提供了一种人源ATP合成酶的纯化方法,制备人源线粒体粗提物,溶膜,得线粒体总蛋白溶液;通过阳离子交换柱、阴离子交换柱及凝胶排阻色谱柱的手段分离纯化人源ATP合成酶。本发明提供的纯化方法具有操作方法简单,实验成本低,时长短的特点,得到的人源ATP合成酶蛋白纯度高,生理活性好,可用于后续的结构功能及药物发现研究。

    一种更加稳定的人源蛋白酶体激活因子突变体的构建方法

    公开(公告)号:CN102899329B

    公开(公告)日:2015-04-15

    申请号:CN201210439608.5

    申请日:2012-11-07

    Applicant: 南开大学

    Abstract: 本发明内容为人源非依赖于泛素化及ATP的一种结构上更加稳定的蛋白酶体激活因子REGgamma突变体REGgammaLinker的构建方法。该方法主要通过分子克隆的手段,分别进行俩次不同的PCR,将原有的REGgamma的60位到107位的氨基酸用六肽Linker(GAVSAG)来取代,从而得到一种更加稳定的突变体。并且对该突变体蛋白进行了原核表达,纯化以及晶体筛选以及结构解析。通过与母体蛋白结构与功能上的实验分析,证明通过该本发明的方法可以获得结构稳定,对蛋白酶体的激活功能没有影响,从而对以后对REGgamma蛋白在生物学上的研究,以及药物开发等方面提供了理论依据。

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