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公开(公告)号：CN103267727A
公开(公告)日：2013-08-28
申请号：CN201310187191.2
申请日：2013-05-20
Applicant: 云南农业大学
CPC classification number: G01N33/5097 , G01N2021/6432 , G01N2021/6439
Abstract: 本发明公开了一种检测稻瘟病菌效应蛋白在水稻根组织内转运的方法，该方法包括以下步骤：稻瘟病菌病原相关分子模式MgNIP53的验证，融合蛋白处理水稻根尖，免疫荧光染色方法处理水稻，观察融合蛋白在水稻根组织内的转运。该方法通过一系列方法鉴定到了一个稻瘟病菌病原相关分子模式MgNIP53，采用融合蛋白处理水稻根尖，最后采用免疫荧光法处理水稻根尖来观察融合蛋白在水稻根组织内的转运，本发明提供的方法简便、准确、快速，为今后开发生物制剂进行有效生物防治稻瘟病提供有力参考。
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公开(公告)号：CN103175809A
公开(公告)日：2013-06-26
申请号：CN201210554679.X
申请日：2012-12-05
Applicant: 云南农业大学
IPC: G01N21/64
Abstract: 本发明公开了一种稻瘟病菌基因的原核表达产物处理水稻根尖诱导水稻系统防御反应的方法，利用一定浓度的融合蛋白处理水稻根尖0.5cm处24h，苯胺蓝和DAB染色后观察除去0.5cm根尖以外的根组织的其他部位的胼胝质形成及活性氧产生情况。本发明的有益效果是利用稻瘟病菌基因的原核表达产物处理水稻根尖0.5cm处，通过观察根尖0.5cm以外根组织其他部分胼胝质和活性氧产生，可明确水稻系统防御反应产生的情况，克服了直接利用病原菌接种水稻叶片观察胼胝质和活性氧产生周期长且易受到叶片组织大量自发荧光干扰等弊端，最终达到为今后鉴定病原菌效应蛋白诱导植物系统防御反应产生提供简便有效的方法的目的。
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公开(公告)号：CN103160518A
公开(公告)日：2013-06-19
申请号：CN201210567931.0
申请日：2012-12-16
Applicant: 云南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种稻瘟病菌的病原基因，保持现有病原菌病原相关分子模式鉴定方法不变，包括胼胝质沉积、活性氧爆发、防御相关基因表达谱分析等方法均与常规相同，其特征是通过一系列的实验证明了该基因具有病原相关分子模式的特性，即该基因是稻瘟病菌病原相关分子模式(PAMPs)。通过一系列方法鉴定到了一个稻瘟病菌病原相关分子模式。该病原相关分子模式可为今后开发生物制剂进行有效生物防治稻瘟病提供有力参考。
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公开(公告)号：CN103048302A
公开(公告)日：2013-04-17
申请号：CN201210554697.8
申请日：2012-12-05
Applicant: 云南农业大学
IPC: G01N21/64
Abstract: 本发明公开了一种检测植物产生免疫反应的方法，保持现有原核表达产物表达纯化及胼胝质和活性氧观察方法不变，采用稻瘟病菌蛋白基因的原核表达产物，按照5.0mg/ml浓度处理水稻持有不同抗性基因的24个水稻单基因系品种及根组织和叶鞘；24小时后进行DAB染色和苯胺蓝染色，荧光显微镜直接观察胼胝质和活性氧的形成情况，通过胼胝质和活性氧的形成情况判断植物是否产生免疫反应，该方法利用纯化的效应蛋白基因的原核表达产物处理水稻根组织，通过荧光显微镜观察根组织胼胝质和活性氧产生，能直接获得水稻产生免疫反应情况，同时获得能引起多个持有不同抗性基因的水稻单基因系品种和感病品种产生免疫反应的稻瘟病菌蛋白。
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公开(公告)号：CN102719513A
公开(公告)日：2012-10-10
申请号：CN201210241046.3
申请日：2012-07-12
Applicant: 云南农业大学
IPC: C12Q1/02
Abstract: 本发明涉及一种功能菌的筛选方法，具体地说涉及一种纤维素降解菌降解能力的判定方法，属微生物分离筛选技术领域。该判定方法的具体步骤如下：按常规方法制作羧甲基纤维素钠培养基，冷却至20℃—80℃，加入灭菌的培养皿内，待培养基冷却后，把纤维素降解菌菌株接种于培养皿中，10℃—35℃培养3 h —96 h；用打孔器打取生长整齐一致的菌饼，置于盛有羧甲基纤维素钠培养基的培养皿中央，10℃—35℃培养；培养3 h —96 h，十字交叉法测量菌落直径，并按下式计算菌丝生长速率：菌丝生长速率=菌落直径-打孔器内直径，所得菌丝生长速率值越大表示纤维素降解菌降解能力越强。本发明的优点在于：判定方法快速、简便，为大量筛选纤维素降解菌提供了一种快捷的方法。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN102634509A
公开(公告)日：2012-08-15
申请号：CN201210126926.6
申请日：2012-04-27
Applicant: 云南农业大学
IPC: C12N15/10
Abstract: 本发明公开了一种直接从感病小麦叶片上高效快速提取小麦条锈菌DNA的方法，其特征在于，吸取20μl配好的20％的chelex-100混悬液于100μl PCR管中，吸取5μl的Chelex-100上清液于长有小麦条锈菌夏孢子小麦叶片上，并在滴有Chelex-100上清液的病斑处反复涂抹叶片多次，将锈孢子洗下后，吸回叶片上含有锈孢子的Chelex-100上清液并加入到装有20μl 20％chelex-100混悬液的PCR管中，用移液器反复吸取混匀，放入沸水浴中水浴2min，再放到旋涡混合器上振荡混匀10s，水浴5min后保存于-20℃备用，上清液均可作为PCR的模板。建立一套高效、快速、可直接从感小麦条锈病菌的植株上提取小麦条锈病菌DNA作为PCR扩增模板的方法。
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公开(公告)号：CN102559575A
公开(公告)日：2012-07-11
申请号：CN201110458326.5
申请日：2011-12-31
Applicant: 云南农业大学
Abstract: 本发明涉及一种用稻瘟病菌效应蛋白基因的原核表达产物处理水稻根组织诱导其产生胼胝质的方法，属于植物保护和生物技术领域。本发明是在现有技术上的改进，包括与常规方法相同的原核表达技术、蛋白纯化技术、所用荧光显微镜的激发光和发射光波长范围、苯胺蓝染色方法，其特征是用稻瘟病菌效应蛋白基因的原核表达产物，1.0mg/ml～10.0mg/ml浓度处理抗病水稻品种日本晴根组织12h后苯胺蓝染色，荧光显微镜直接观察胼胝质形成。本发明方法简便、准确、快速；能有效地避免较多自发荧光干扰，能直接定性地获得水稻基本防御反应产生的情况。
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公开(公告)号：CN101580872B
公开(公告)日：2012-02-22
申请号：CN200810233641.6
申请日：2008-11-25
Applicant: 云南农业大学
IPC: C12Q1/68
Abstract: 本发明涉及一种稻瘟病菌侵染后期高度表达的基因及其编码产物的体外功能检测的方法，属于植物保护和生物技术领域。本发明的技术方案是保持目前基因克隆与表达的方法，如引物设计、PCR扩增、real-time PCR、连接、转化、蛋白表达均与常规相同，不同的是该基因为稻瘟病菌侵染水稻后期高度表达的基因，与前人研究的稻瘟病菌基因多为稻瘟病菌侵染早期高度表达的基因有区别，其编码产物是小蛋白，由88个氨基酸组成，相对分子量为8.8kDa，其体外表达产物按照0.5mg/ml～2.5mg/ml的浓度直接接种到致伤的丽江新团黑谷水稻叶片后能引起水稻叶片产生病斑。本发明比传统稻瘟病菌致病性测定方法简便、快速。
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公开(公告)号：CN101720608A
公开(公告)日：2010-06-09
申请号：CN200810233506.1
申请日：2008-10-29
Applicant: 云南农业大学
IPC: A01G1/00
Abstract: 本发明涉及一种玉米晚播控制玉米大斑病的方法，属植物保护学领域。本发明的技术方案是保持目前常规种植玉米的施肥及田间管理方法不变，不同的是玉米晚播，7月播种11月收获；大小行种植，玉米种植规格为小行50～60cm，每三个小行为一种植带，种植带即大行行距为100～140cm。其中玉米的种植密度为每亩3300～3800株；玉米种植品种为生育期较短的品种；该方法可以适用于烟地、蔬菜地等中种植。本发明为玉米大斑病的生态控制提供了新方法，有着良好的社会经济和生态效益。
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公开(公告)号：CN101580872A
公开(公告)日：2009-11-18
申请号：CN200810233641.6
申请日：2008-11-25
Applicant: 云南农业大学
IPC: C12Q1/68
Abstract: 本发明涉及一种稻瘟病菌侵染后期高度表达的基因及其编码产物的体外功能检测的方法，属于植物保护和生物技术领域。本发明的技术方案是保持目前基因克隆与表达的方法，如引物设计、PCR扩增、real－time PCR、连接、转化、蛋白表达均与常规相同，不同的是该基因为稻瘟病菌侵染水稻后期高度表达的基因，与前人研究的稻瘟病菌基因多为稻瘟病菌侵染早期高度表达的基因有区别，其编码产物是小蛋白，由88个氨基酸组成，相对分子量为8.8kDa，其体外表达产物按照0.5mg/ml～2.5mg/ml的浓度直接接种到致伤的丽江新团黑谷水稻叶片后能引起水稻叶片产生病斑。本发明比传统稻瘟病菌致病性测定方法简便、快速。
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