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公开(公告)号：CN102925368B
公开(公告)日：2014-01-01
申请号：CN201210441085.8
申请日：2012-11-07
Applicant: 浙江大学宁波理工学院 , 宁波美诺华药业股份有限公司
Abstract: 本发明公开了一种可催化不对称还原反应的球孢白僵菌(Beauveriabassiana)，该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物保藏中心，保存号为：CGMCC NO.6345，保藏时间2012年7月12日。本发明的菌株可以表达高立体选择性的羰基还原酶，利用该菌株进行4-氯乙酰乙酸乙酯的全细胞催化时，产物中S-4-氯-3-羟基丁酸乙酯的对映体过量值达到100％e.e.；利用该菌株进行N，N-二甲基-3-氧代-3-(2-噻吩)-1-丙胺盐酸盐的全细胞催化时，产物中(S)-N，N-二甲基-3-羟基-3-(2-噻吩)-1-丙胺盐酸盐的对映体过量值达到100％e.e.。
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公开(公告)号：CN103013898A
公开(公告)日：2013-04-03
申请号：CN201210440849.1
申请日：2012-11-07
Applicant: 宁波美诺华药业股份有限公司 , 浙江大学宁波理工学院
Abstract: 本发明公开了一种表达羰基还原酶的重组工程菌及其应用，该工程菌包括宿主细胞和转入宿主细胞的重组载体，所述重组载体由原始载体及接入原始载体的目的基因构成，所述宿主细胞为大肠杆菌(Escherichiacoli)Rosetta(DE3)，所述的目的基因为羰基还原酶基因，碱基序列如SEQ ID NO.1所示。本发明重组工程菌羰基还原酶表达水平较高，利用诱导培养的菌体细胞将氮，氮-二甲基-3-氧基-3-(2-噻吩)-l-丙胺盐酸盐转化为(S)-氮，氮-二甲基-3-羟基-3-(2-噻吩)-l-丙胺；或将4-氯乙酰乙酸乙酯转化为(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯，两种产物的光学纯度及转化率均较高。
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公开(公告)号：CN102925368A
公开(公告)日：2013-02-13
申请号：CN201210441085.8
申请日：2012-11-07
Applicant: 浙江大学宁波理工学院 , 宁波美诺华药业股份有限公司
Abstract: 本发明公开了一种可催化不对称还原反应的球孢白僵菌(Beauveriabassiana)，该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物保藏中心，保存号为：CGMCC NO.6345，保藏时间2012年7月12日。本发明的菌株可以表达高立体选择性的羰基还原酶，利用该菌株进行4-氯乙酰乙酸乙酯的全细胞催化时，产物中S-4-氯-3-羟基丁酸乙酯的对映体过量值达到100％e.e.；利用该菌株进行N，N-二甲基-3-氧代-3-(2-噻吩)-1-丙胺盐酸盐的全细胞催化时，产物中(S)-N，N-二甲基-3-羟基-3-(2-噻吩)-1-丙胺盐酸盐的对映体过量值达到100％e.e.。
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公开(公告)号：CN101333520B
公开(公告)日：2012-05-23
申请号：CN200810061398.4
申请日：2008-04-25
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种细胞色素P450 BM-3 D168R变体酶以及应用其制备靛玉红的方法。该酶是采用定向进化技术，以P450 BM-3(F87V/A74G/L188Q/E435T)为父本，通过在父本基因中编码第168位天冬氨酸残基的密码子处进行定点饱和突变后经筛选获得的。其碱基序列如序列表中SEQ ID NO.1所示，原位点处的密码子由GAT突变为CGG，对应的氨基酸残基由天冬氨酸突变为精氨酸。本发明的P450 BM-3 D168R变体酶在催化吲哚时，所得产物以靛玉红为主，产物呈现明显的红色特征。
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公开(公告)号：CN101333521B
公开(公告)日：2010-12-15
申请号：CN200810061399.9
申请日：2008-04-25
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种细胞色素P450BM-3D168W变体酶以及应用其制备靛玉红的方法。该酶是采用定向进化技术，以P450BM-3(F87V/A74G/L188Q/E435T)为父本，通过在父本基因中编码第168位天冬氨酸残基的密码子处进行定点饱和突变后经筛选获得的。其碱基序列如序列表中SEQ ID NO.1所示，原位点处的密码子由GAT突变为TGG，对应的氨基酸残基由天冬氨酸突变为色氨酸。本发明的P450BM-3D168W变体酶在催化吲哚时，所得产物以靛玉红为主，产物呈现明显的红色特征。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN101333520A
公开(公告)日：2008-12-31
申请号：CN200810061398.4
申请日：2008-04-25
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种细胞色素P450 BM－3 D168R变体酶以及应用其制备靛玉红的方法。该酶是采用定向进化技术，以P450 BM－3(F87V/A74G/L188Q/E435T)为父本，通过在父本基因中编码第168位天冬氨酸残基的密码子处进行定点饱和突变后经筛选获得的。其碱基序列如序列表中SEQ ID NO.1所示，原位点处的密码子由GAT突变为CGG，对应的氨基酸残基由天冬氨酸突变为精氨酸。本发明的P450 BM－3 D168R变体酶在催化吲哚时，所得产物以靛玉红为主，产物呈现明显的红色特征。
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公开(公告)号：CN100439502C
公开(公告)日：2008-12-03
申请号：CN200610052586.1
申请日：2006-07-21
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种能催化吲哚生成靛蓝的P450BM-3Asp168Leu变体基因，利用饱和突变定向进化技术介导的随机突变，筛选获得，其碱基序列如序列表中SEQ ID NO.1所示，原P450BM-3(F87V/A74G/L188Q)基因中的第168位的天冬氨酸的密码子突变为亮氨酸的密码子。所得到的变体基因表达的变体酶通过酶动力学曲线的测定，与现有技术相比较，催化效率显著提高，为生物合成染料靛蓝提供了更加具有应用价值的新酶，同时为染料靛蓝的生物生产提供了更加广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN1900286A
公开(公告)日：2007-01-24
申请号：CN200610052586.1
申请日：2006-07-21
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种能催化吲哚生成靛蓝的P450BM－3Asp168Leu变体基因，利用饱和突变定向进化技术介导的随机突变，筛选获得，其碱基序列如序列表中SEQ ID NO.1所示，原P450BM－3(F87V/A74G/L188Q)基因中的第168位的天冬氨酸的密码子突变为亮氨酸的密码子。所得到的变体基因表达的变体酶通过酶动力学曲线的测定，与现有技术相比较，催化效率显著提高，为生物合成染料靛蓝提供了更加具有应用价值的新酶，同时为染料靛蓝的生物生产提供了更加广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN1295342C
公开(公告)日：2007-01-17
申请号：CN200510049189.4
申请日：2005-03-07
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种控制pH发酵生产γ-氨基丁酸的方法。保藏编号为：CGMCC NO.1306的短乳杆菌(Lactobacillus brevis)，经琼脂斜面培养基活化后，转接于GYP种子培养基中，培养25～35小时后，以5～10%的接种量接种于发酵罐中，发酵罐装液量为1～3L，搅拌转速为50～150r/min，在30℃下静置培养，对其进行pH控制发酵，发酵培养约25～40小时，待菌体生长进入稳定期，pH值回升后，连续流加1～3mol/L的盐酸，发酵培养基pH控制在5.0～5.6，继续培养约40～60h，即得含γ-氨基丁酸的发酵液。本发明的优点：在于通过在稳定期控制pH发酵，GABA的产量达到30g/L，工艺简单，环境污染小、操作方便，GABA产量高。
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公开(公告)号：CN1276077C
公开(公告)日：2006-09-20
申请号：CN200510049188.X
申请日：2005-03-07
Applicant: 浙江大学
IPC: C12N1/20 , C12R1/24 , C12P13/00 , C07C229/08
Abstract: 本发明公开了一种产γ-氨基丁酸的短乳杆菌及其用途。短乳杆菌(Lactobacillus brevis)，其保藏编号为：CGMCC NO.1306，显微镜观察成对或成链状出现，不运动，无孢子，菌落小，表面光滑；属于革兰氏阳性菌株，兼性厌氧。保藏编号为：CGMCC NO.1306的短乳杆菌(Lactobacillus brevis)用于生产γ-氨基丁酸。本发明采用生物法合成γ-氨基丁酸是利用乳酸菌体内含有高活性的谷氨酸脱羧酶，此酶以L-谷氨酸钠(L-MSG)为底物，将L-谷氨酸钠(L-MSG)α-脱羧，产生γ-氨基丁酸和CO2。乳酸菌制品的健康功效世人公认，被FDA认为是GRAS(generally recognized as safe)级食品添加剂。因此，此法生产的γ-氨基丁酸不存在安全上的隐患，能达到食品安全级。
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